免DNA提取PCR試劑盒（PCR直擴試劑盒）

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品是可以直接用新鮮的動物、植物、細(xì)菌樣品的裂解液進(jìn)行 PCR 擴增的試劑盒，它具有下列特點:

1. 操作簡單，免去 DNA 提取、蛋白去除、RNA 去除等步驟，15 分鐘即得用于 PCR的模板，一個實驗員每天可以篩選上千個樣品，尤其適用于大規(guī)模育種篩選和臨床篩選。

2. 兼容性廣，可以用于幾乎所有的分子生物學(xué)樣品，包括細(xì)菌、昆蟲、真菌、各種植物、各種動物、法醫(yī)樣品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發(fā)、組織樣品、口腔細(xì)胞和 FTA 卡）、石蠟組織切片等。

3. 成本低廉，從提取到 PCR 處理每個樣品的成本才一元左右，在大模篩選時能節(jié)約成本。

4. 環(huán)保健康，不使用任何有毒有害的試劑。

5. 本試劑盒足夠處理 400 份樣品，足夠 400 次 20uL 體系的 PCR。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝
免提 PCR 溶液 A 成分一 LM130985a 400 μL(白色蓋)
免提 PCR 溶液 A 成分二 LM130985b 800 μL(綠色蓋)
免提 PCR 溶液 B LM130985c 1 mL×4(紅色蓋)
PCR MagicMix 3.0，2× 90805 1 mL×4(黃色蓋)
使用手冊 130985sc 1 份

運輸及保存 低溫運輸，溶液 A 成分一和成分二、溶液 B 可以常溫放置，PCR MagicMix 3.0 需要-20℃保存。有效期一年。

自備試劑 PCR 引物和模板，超純水

使用方法1. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足夠 10 個樣品）為例：在一干凈塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超純水，充分混合均勻即可。溶液 A 工作液可室溫放置，但好在一周內(nèi)用完，不要長期放置。一次檢測一個樣品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足夠 10 個樣品。如果待測樣品數(shù)量為其他數(shù)字，配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。

2. 根據(jù)材料不同參考下表取少量樣品到一干凈的塑料離心管中。

樣品種類 取用量

動物組織 1-5 mg

鼠尾 2mm 長

血液樣品 不超過 20 uL

植物葉片 1-5 mg

植物種子（去皮） 1-5 mg

酵母培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物沉淀

細(xì)菌培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物沉淀

注意：未列出樣品，用戶需要自己摸索最佳用量。對富含多醌多酚的植物材料（如棉花），

組織使用量最好不要超過 0.5mg。

3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液，確保樣品被溶液淹埋。

4. 95℃保溫 10 分鐘。

5. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得細(xì)胞裂解液。

6. 直接用裂解液作為模板設(shè)置 30 uL 體系的 PCR 反應(yīng)體系如下：

成分 用量

PCR MagicMix 3.0 10 uL

細(xì)胞裂解液（來于上步） 1-2 uL

自備 PCR 引物 1（10uM） 1 uL

自備 PCR 引物 2（10uM） 1 uL

補水到 20 uL

注意：裂解液體積最好不要超過 PCR 體積的 1/10。

7. 放入 PCR 儀中進(jìn)行 PCR，PCR 參數(shù)需要根據(jù)引物 Tm 值和靶分子長度等參數(shù)設(shè)

置。一般不低于 35 次循環(huán)。

8. PCR 結(jié)束后取 5-10 uL 直接上樣電泳（本產(chǎn)品不需要上樣液即可直接上樣），紅色染料電泳速度相當(dāng)于 50 bp DNA 片段。

9. 如果沒有預(yù)期的擴增，細(xì)胞裂解液中可能是有 PCR 抑制劑（植物、土壤和血液等DNA 樣品常含此類抑制物），建議把細(xì)胞裂解液分別稀釋 10 倍和 100 倍再用 3uL進(jìn)行 PCR 擴增。也可以在 PCR 體系中加入 1/10 的本公司的 PCR 抑制物清除劑（CAT#：60804，30uL 體系中加 3uL。需要另購），可能會對 PCR 有幫助。