即用型高保真PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是即用型的 2×高保真 PCR 預(yù)配反應(yīng)液，含有除引物、模板以外的所有PCR 試劑，包括 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等，特別適合于高保真 PCR 反應(yīng)。

1. Pfu DNA 聚合酶是使用最廣泛的高保真酶，其保真度為普通 Taq 酶的 10 倍。

2. 使用時(shí)只需在加入模板和引物并稀釋到 1 倍濃度即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)，非常方便，簡(jiǎn)化了 PCR 的準(zhǔn)備工作。

3. PCR 反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配置。由于加樣過程少，有利于減少污染，降低實(shí)驗(yàn)誤差。

4. 本產(chǎn)品含電泳染料，PCR 反應(yīng)液可直接上樣電泳，進(jìn)一步簡(jiǎn)化了操作。

5. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。

6. 適用于基因的高保真擴(kuò)增和基因定點(diǎn)突變等實(shí)驗(yàn)，得到的 PCR 產(chǎn)物可用于平末端克隆。
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 塑料袋包裝
2×高保真 PCR MagicMix 90708a 1.5 mL（黃蓋）
使用手冊(cè) 90708sc 1 份 

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑 模板和引物。

使用方法 將本產(chǎn)品與用戶自備的模板，引物混合液按下列推薦使用量（30 uL 反應(yīng)體系）加入 PCR 管中即可進(jìn)行 PCR，反應(yīng)結(jié)束后直接取 5-15 uL 電泳檢查擴(kuò)增結(jié)果。如果反應(yīng)體系不是 30 uL，各成分需要按比例增加或減少。

2×高保真 PCR MagicMix 15 uL

DNA 模板(自備)

哺乳動(dòng)物基因組 DNA 0.5-1 ug

酵母基因組 DNA 5-500 ng

細(xì)菌基因組 DNA 0.5-50 ng

質(zhì)粒 DNA 5-500 pg

PCR 回收片段 1-100 pg

PCR 引物(自備) 10-20 pmol each

補(bǔ)水到 30 uL

放入 PCR 儀中進(jìn)行 PCR。由于含有電泳示蹤劑（注意：不是溴化乙錠等 DNA染料），故 PCR 結(jié)束后可以取 5-10 uL 直接上樣電泳, 紅色染料電泳速度相當(dāng)于 50

bp DNA 片段。

參考擴(kuò)增條件：

預(yù)變性 94℃ 4 min

PCR (30 個(gè)循環(huán))

94℃ 30 s

50℃ 30 s

68℃ 0.5kb/ min

延伸 68℃ 10 min

注意：

1. 本產(chǎn)品的 Pfu DNA 聚合酶比 Taq DNA 聚合酶的延伸反應(yīng)速率低，因此我們推薦的擴(kuò)增延伸反應(yīng)時(shí)間為每 kb 需 2 分種。

2. Pfu 酶 3’-5’外切酶活性可降解引物，所以強(qiáng)烈建議在冰上配置完成 PCR反應(yīng)液后，立即放入 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增完畢后立即進(jìn)行電泳檢測(cè)。

3. 本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，不可以直接進(jìn)行 TA 克隆，可以使用B 載體(CAT#:51104)進(jìn)行克隆。如需要進(jìn)行 TA 克隆，建議對(duì) PCR 產(chǎn)物純化后，用加 A 試劑盒(CAT#:60105)加 A 后再進(jìn)行 TA 克隆。

4. 由于 Pfu 無 5’到 3’外切酶的活性，所以本試劑盒不能用于實(shí)時(shí)熒光PCR 。