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LBM-60水質(zhì)毒性檢測儀采用發(fā)光細(xì)菌法，遵循《GB／T15441-1995》、《ISO-11348-3》標(biāo)準(zhǔn)，所用發(fā)光細(xì)菌在正常新陳代謝時發(fā)出450-490nm的藍(lán)綠熒光，一旦遇到外界的毒性物質(zhì)，就會對發(fā)光細(xì)菌的新陳代謝產(chǎn)生影響，進(jìn)而抑制發(fā)光強(qiáng)度。發(fā)光細(xì)菌所受的抑制大小和外界毒性物質(zhì)的毒性大小相關(guān)。該方法從生物學(xué)的角度為環(huán)境質(zhì)量的檢測和評價提供了依據(jù)，該檢測儀可以在現(xiàn)場快速的對水質(zhì)污染情況進(jìn)行檢測，該儀器是常規(guī)理化科學(xué)儀器的有效補(bǔ)充。

LBM-60便攜式水質(zhì)毒性檢測儀采用雙光路對照檢測技術(shù)，可以在檢測過程中對整個毒性抑制情況進(jìn)行動力學(xué)檢測，清楚的了解毒性接觸反應(yīng)的過程，彌補(bǔ)單一測量結(jié)果評價毒性大小的不足。

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各級環(huán)境檢測部門、疾病預(yù)防控制中心作為應(yīng)急監(jiān)測項目；污染源現(xiàn)場快速篩查、檢測；水質(zhì)處理中的進(jìn)出水、加工用水、地表水、以及滲濾毒性的檢測；教學(xué)演示及科學(xué)研究等。

1· 雙光路對照檢測技術(shù)，可對毒性抑制的動力學(xué)過程進(jìn)行檢測

2· 支持野外長時間連續(xù)監(jiān)測，待機(jī)時間超過10小時

3· 小巧輕便，手持式操作

4· 中文界面，操作方便

5· 菌種質(zhì)量可靠，性能穩(wěn)定

6· 快捷的技術(shù)服務(wù)

功能性能：

1· 速度快，zui快5min完成檢測

2· 重復(fù)性好（ＣＶ值小于５%）

3· 一次檢測能夠定性鑒別被測水樣中的綜合毒性等級

4· 檢測范圍寬，可檢測重金屬離子、有機(jī)農(nóng)藥、有機(jī)和無機(jī)有毒物質(zhì)等

       5.方法簡便，不需生物專  業(yè)人員

重金屬、殺蟲劑、滅菌劑、除草劑、工業(yè)化學(xué)品等

(1)了解發(fā)光菌的生物毒性測試方法和基本原理。

(2) 掌握發(fā)光菌的基本培養(yǎng)方法和生物毒性測定儀的基本結(jié)構(gòu)和原理，并能進(jìn)行正確的操作和使用。

二、原理

發(fā)光菌的生物毒性測試是20世紀(jì)70年代建立的生物測試方法。發(fā)光菌是一種海洋發(fā)光細(xì)菌，屬非致病的革蘭氏陰性兼性厭氧細(xì)菌，它們在適當(dāng)條件培養(yǎng)后，能發(fā)出肉眼可見的藍(lán)綠色光。細(xì)菌的發(fā)光過程是菌體內(nèi)一種新陳代謝的生理過程，是呼吸鏈上的一個側(cè)支，即菌體是借助活體細(xì)胞內(nèi)具有ATP,熒光素（FMN)和熒光素酶發(fā)光的。綜合化學(xué)反應(yīng)過程為

                            細(xì)菌熒光酶

FMNH2 +RCHO+O2————→FMN+RCOOH+H2+hv

該光波長為490nm左右。這種發(fā)光過程極易受到外界條件影響。凡是干擾或損害細(xì)菌呼吸或生理過程的任何因素都能使細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度發(fā)生變化。當(dāng)有毒物質(zhì)與發(fā)光菌接觸時，發(fā)光強(qiáng)度立即改變，并隨著毒物濃度的增加而發(fā)光減弱。這種發(fā)光強(qiáng)度的變化，可用一種精密測光儀測定。美國Microbics公司設(shè)計制造了一套微毒測定儀器。中國科學(xué)院南京土壤研究所、華東師范大學(xué)生物學(xué)系也分別成功地研制了DXY-2型生物毒性測試儀和SDJ-1型生物發(fā)光光度計。

目前，國內(nèi)外采用的發(fā)光細(xì)菌實驗有三種測定方法：①新鮮發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)測定法。②發(fā)光細(xì)菌和海藻混合測定法。③冷凍干燥發(fā)光菌粉制劑測定法。本實驗采用新鮮發(fā)光菌培養(yǎng)法或冷凍干燥發(fā)光菌粉制劑法檢測環(huán)境樣品的生物毒性。

三、儀器與試劑

(1) LB-60型生物毒性測試儀。

(2）恒溫磁力攪拌器。

(3）培養(yǎng)液。

酵母浸出汁                               0. 5g

胰蛋白陳(tryptone)                    0.5g

NaCl                                       3. 0g

Na2 HPO4                               0. 5g

KH2PO4                                  0. l g

甘油                                        0. 3g

蒸餾水                                加至100mL

pH調(diào)至7±0.5，經(jīng)121℃，151b/ln215min高壓滅菌后置冰箱備用。

(4）固體培養(yǎng)基。

上式培養(yǎng)液                            100mL

瓊脂粉                                   2. 0g

pH調(diào)至7±0.5，經(jīng)121 ℃，151b/in215min高壓滅菌后置冰箱備用。

(5）稀釋液。

3%NaCl溶液                            500mL

2% NaCl溶液                              l0mL

(6）參比毒物。0. 02-0. 24mg/L HgCl2系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(7）待測物。視需要而定（化學(xué)毒物或綜合廢水）。

(8）實驗生物。新鮮明亮發(fā)光桿菌（Photobaclerium phosphortum) T3變種或明亮發(fā)光桿菌凍干粉，均由中國科學(xué)院南京土壤研究所微生物室提供。

四、實驗步驟

1．菌種準(zhǔn)備

1) 發(fā)光細(xì)菌新鮮菌懸液的制備（第1法）

(1) 斜面菌種培養(yǎng)。于測定前48h取保存菌種，于新鮮斜面上接出第一代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)24h立即轉(zhuǎn)接第二代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h，再接出第三代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h后備用。每次接種量不超過1接種耳。

(2）搖瓶菌液培養(yǎng)。取第三代斜面菌種近1環(huán)，幾接種于裝有50mL培養(yǎng)液的250mL三角瓶內(nèi)，(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培養(yǎng) 12-14h，備用。

(3) 將培養(yǎng)液稀釋至每毫升108一109個細(xì)胞，初始發(fā)光度不低于800mV，置冰浴中備用。

2）菌液復(fù)蘇（第2法）

取冷藏的發(fā)光菌凍干粉，置冰浴中，加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液，充分搖勻，復(fù)蘇2min，使其具有微微綠光，初始發(fā)光度不低于800mV。

2．樣品采集與處理

1) 水樣

(1) 從不同工業(yè)廢水的各排放口，每4h采樣一次，每次取樣后于4℃保存，連續(xù)采集24h后，均勻混合后備用。

(2) 納污水體取其入口、中心、出口三個斷面混合水樣備用。

(3）以同上方法采集清潔水，作空白對照。

濁度大的污水，需靜置后取上清液。一般樣品不需加任何處理。水樣按3%比例投加NaCl，置冰箱備用。

2) 氣體樣品

以大氣采樣法采取一定體積的大氣樣品，通過氣體吸收液（(5mL)中吸收，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用，同法收集清潔空氣作為對照組。

3) 固體樣品

取固體廢棄物，按《工業(yè)固體廢棄物有害特性試驗與監(jiān)測分析方法》制備浸出液，取上清液，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用。

3．實驗濃度的選擇

在預(yù)備實驗的濃度范圍內(nèi)，按等對數(shù)間距或百分濃度取3-5個實驗濃度，同時設(shè)空白對照和參比毒物系列濃度組。

4．發(fā)光細(xì)菌法生物毒性瀏定

1) 工業(yè)廢水或有毒物質(zhì)的生物毒性測定

(1) 發(fā)光菌懸液初始發(fā)光度測定。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管內(nèi)，加新鮮發(fā)光菌懸液或凍干粉復(fù)蘇菌懸液10μL，若測量發(fā)光度在800mV以上，允許置冰浴中備用。

(2) 取已處理待測廢水樣品，按等對數(shù)間距或百分濃度編號，并注明采集點。

(3) 按表4-40-1依次加入稀釋液，待測水樣及參比毒物系列濃度溶液。

(4) 打開生物毒性測試儀電源，預(yù)熱15min，調(diào)零點，備用。

(5) 每管加入菌懸液10μL，準(zhǔn)確作用5 min或15min，依次測定其發(fā)光強(qiáng)度，記錄毫伏數(shù)。

每個濃度設(shè)3管重復(fù)。

2) 工業(yè)廢氣（或有害氣體）的生物毒性測定

(1) 氣體直接通入法。用注射器直接注入氣體于菌懸液中，經(jīng)10-20min測定發(fā)光菌強(qiáng)度的變化。

(2) 氣體吸收法。方法同工業(yè)廢水測定法。

(3) 固體菌落法。挑選固態(tài)培養(yǎng)對數(shù)生長期的發(fā)光菌單菌落，連同培養(yǎng)基切下，置比色管內(nèi)，測定初始發(fā)光強(qiáng)度，然后用注射器將待測氣體注入菌苔表面，經(jīng)10-20min后，測定發(fā)光度的變化。

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