粗提酵母tRNA溶液A，5mg/mL

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品分 A 和 B 兩個(gè)純度級(jí)別，濃度均為 5mg/mL。A 是酵母 tRNA 粗提液， 用作制備更高純度（如分子生物級(jí)）酵母 tRNA 的原材料或斑點(diǎn)雜交液添加成分。 B 是精提液，是經(jīng)過(guò)本公司柱式 RNAclean 純化的分子生物學(xué)級(jí)別的酵母 tRNA 溶 液，不含蛋白質(zhì)和 DNA 污染，OD260/OD280 在 1.9 左右，可直接用作微量 RNA 提取和回收的助沉劑，也可以用作原位雜交、Northern 雜交的封堵劑，對(duì)于探針 為 RNA 的雜交試驗(yàn)尤其適用。 
規(guī)格及成分 70904A 包裝
成 份 編 號(hào) 塑料袋包裝
tRNA 溶液粗提液 70904a 1.5 mL
使用手冊(cè) 70904sc 1 份
70904B 包裝
成 份 編 號(hào) 塑料袋包裝
tRNA 溶液精提液 70904b 或 1.5 mL
使用手冊(cè) 70904sc 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年

自備試劑 根據(jù)情況 

使用方法 一：以 tRNA 粗提液（70904a）為材料，酚法制備 tRNA 精提液（70904b）

1. 在 1 倍體積的 tRNA 粗提液中加入一倍體積的自備 Tris 飽和酚，振蕩混勻后 12000-15000 g 離心 3 分鐘得上清。

2. 在上清中再加入一倍體積的自備 Tris 飽和酚和 0.2 倍體積自備的氯仿，振蕩 混勻后 12000-15000 g 離心 3 分鐘得上清。

3. 重復(fù)此步直到酚相和水相之間沒(méi)有白膜出現(xiàn)。一般需要 2-4 次抽提。

4. 在上清中加入 0.1 倍體積的自備 3M NaAc（pH5.2）和 2 倍體積的自備無(wú)水 乙醇，振蕩混勻。

5. 12000-15000 g 離心 15 分鐘以上，小心移棄上清。

6. 用 1mL 自備 75%乙醇洗一次（即加入 1mL 75%乙醇，振蕩混勻后 12000-15000 g 離心 5 分鐘，小心移棄上清）。

7. 短暫離心數(shù)秒，小心移棄殘留液體，所得沉淀即是精提的酵母 tRNA，可以溶 解在自備的 DEPC 水中，UV 測(cè)定其濃度，然后直接用于各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。 注意：tRNA 比較短，又是單鏈，所以電泳時(shí)結(jié)合 EB 等染料的能力很弱，測(cè) 定其濃度時(shí)好不要使用電泳比較法，而要使用分光光度法。

注意：此法得率較高，但缺點(diǎn)是不能去除部分多糖污染，因?yàn)槎嗵且材茉诖汲恋頃r(shí) 沉淀下來(lái)。如果后得到的溶液帶顏色，則需要用本公司柱式 RNAclean 精提，詳 細(xì)過(guò)程見該產(chǎn)品使用手冊(cè)。 

二：tRNA 精提液（70904b）作為核酸助沉劑

1. 在核酸(DNA 或/和 RNA)溶液中，加入適當(dāng)濃度的鹽離子，鹽離子不同其終濃 度也不相同，具體如下： 鹽 終濃度 NH4OAc (醋酸銨） 0.5 M NaCl (氯化鈉) 0.25 M NaOAc (醋酸鈉） 0.3 M 2. 加入本產(chǎn)品使其終濃度為 20 ug/mL，混合均勻。

3. 加入兩倍體積的乙醇，混合均勻。

4. 冰上放置 15 分鐘。

5. 12000-15000 g 離心 15 分鐘以上，小心移棄上清。

6. 用 1mL 75%乙醇洗一次（即加入 1mL 75%乙醇，振蕩混勻后 12000-15000 g 離心 5 分鐘，小心移棄上清）。

7. 短暫離心數(shù)秒，小心移棄殘留液體。

8. 將沉淀溶于適當(dāng)緩沖液中待用。

注：由于 tRNA 是多聚核苷酸激酶和末端轉(zhuǎn)移酶的底物，因此如果回收的 DNA 或 RNA 要用于此類反應(yīng)，就不能使用 tRNA 作為助沉劑。如果回收的 RNA 要用于 RT-PCR，使用 tRNA 可能會(huì)對(duì)反應(yīng)的特異性產(chǎn)生干擾。

二：tRNA 精提液（70904a 或 70904b）作為雜交封堵劑

tRNA 粗提液可以作為菌斑雜交液的封堵成分，tRNA 精提液可以作為原位雜 交液、Northern 雜交液和 RNA 斑點(diǎn)雜交液的封堵劑，也可以作為 Southern 雜 交液和 DNA 斑點(diǎn)雜交液的封堵劑，但不適于作為菌斑雜交。其在雜交液或預(yù)雜交 液中的終濃度為 100ug/mL。如果使用 RNA 探針，好使用 tRNA 精提液做封堵 劑，以保護(hù) RNA 探針。