超快DNA-RNA兩用轉膜試劑盒

產品及特點本產品是基于毛細管轉膜法的 Southern 和 Northern 印跡膜制備試劑， 專門用于從電泳得到的凝膠中制備用于 Southern 雜交和 Northern 雜交的 印跡膜。本產品具有下列特點：

1. 即開即用，提供制備 5 次 Southern 或 Northern 轉膜（13×20cm）所 需要的轉膜液。

2. 快速：轉膜過程只需要 1 小時，整個過程（加上變性和中和等步驟）只 需要 2.5 小時(對 DNA)或 1.5 小時（對 RNA）。

3. 跟硝酸纖維素膜、帶電尼龍膜、中性尼龍膜和 PVDF 膜兼容。包括Nytron、 Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon 等。

4. 硝酸纖維素膜適用于最小長度在 400bp 以上的靶分子，帶電尼龍膜適用 于最小長度在 40bp 以上的靶分子。

5. 使用優(yōu)化的下向轉膜法，不但效率比上行轉膜法高 30%左右，而且條帶 彌散度低、分辨率高。

6. 可用瓊脂糖膠（包括脈沖電泳膠，DNA 電泳、RNA 甲醛膠電泳和 RNA 戊二醛電泳）和 DNA PAGE 膠。 
規(guī)格及成分 成份 編號 大紙盒包裝
成分 A LM121110A 660 g
溶液 B LM121110B 100 mL
中和液 LM121110C 50 mL×5
使用手冊 LM121110sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸及保存，有效期 1 年。

自備試劑 瓊脂糖電泳試劑、去離子水、印跡膜（硝酸纖維素膜或尼龍膜） 

使用方法 一：Southern 印跡膜的制備（DNA 轉膜，中性尼龍膜，硝酸纖維素膜）

1. 按常規(guī)方法進行電泳（包括脈沖電泳），本試劑盒不提供電泳所需試劑。如果進行常規(guī)的 Southern 雜交，建議使用 0.7%瓊脂糖進行電泳，分離酶切的基因組 DNA。電泳時好加電泳分子量對照、酶切對照（先將標記的全長 lambda DNA 或探針質粒與樣品 DNA 的混合，再酶切）、陰性樣品（不含 檢測片段 的 DNA 樣 品）、雜 交分子量 對照（標 記的lambda/Hind III）等。電泳后和熒光標尺并排拍照。

2. 變性：首次使用時需配制變性液 2.5L（在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約2L 自備的去離子水，攪拌緩慢中加入 220g 成分 A 和 100 mL 溶液 B，溶解后定容到 2.5L 后即可用），將凝膠轉移到一個至少含 10 倍于膠體積的變性液中，脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 60 分（如果使用帶正電尼龍膜，此步處理可以縮短到 30 分鐘）。未用完的變性液可放瓶中室溫保存。

3. 配制轉膜液：如果使用帶正電的尼龍膜，則直接用上步配制的變性液轉膜如果使用中性尼龍膜和硝酸纖維素膜，則需配置轉膜液（在 3L 的干凈玻璃燒杯中加入約 2L 自備的去離子水，緩慢攪拌中加入 440g 成分 A 和 2mL 溶液 B，溶解后定容到 2.5L 后即可用）。將凝膠轉移到至少 10 倍于凝膠體積的轉膜液中，脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 15 分。

4. 設置轉膜體系：測量凝膠的大小，然后借助尺子準確切出一張印跡膜，每邊比凝膠大 1mm，并切去一角，將印跡膜漂浮于去離子水上 20 分鐘確保全部濕潤，再按下圖設置下行轉膜體系（比上行轉膜體系效率高 30%）。圖中 membrane 即印跡膜，transfer buffer 即轉膜液，吸水濾紙厚度為 2-3cm，一般按每 cm2 印跡膜需要 1 mL 轉膜液的比例準備轉膜液。對大的凝膠，可以同時使用兩張濾紙分別跟兩個容器的轉膜液連接以便使轉膜勻漿。

5. 洗膠：凝膠轉移到一個含至少 10 倍于膠體積的轉膜液中，脫色搖床上室溫下?lián)u晃處理 15 分。

6. 轉膜：常溫轉膜 1 小時。結束后用鉛筆標記印跡膜的核酸結合面以免搞錯。注意：不要過夜轉膜，否則信號將降低 50%。

7. 中和：將印跡膜在中和液中處理 10 分鐘，中和液的用量至少為 0.5mL/cm2印跡膜。中和液容易長細菌，不建議長期放置。

8. 檢測效果：可將凝膠放入 EB（0.5ug/mL）溶液中染色 30 分鐘后 UV下觀察殘留核酸的量，反推轉膜效率。此步也可跳過。也可以另購印跡膜染液（CAT#:70104-100）處理印跡膜，日光下觀察轉膜效果。

9. 固定：將印跡膜夾在兩層濾紙中間 80℃干燥 15 分鐘以固定核酸（不需真空），干燥時間不需延長，否則雜交信號可能會降低。

10. 此時印跡膜可直接用于后續(xù)的核酸雜交實驗或者在干燥狀態(tài)下保存待用（可放數(shù)月）。

二：Southern 印跡膜的制備（帶正電尼龍膜，DNA 轉膜）

11. 電泳步驟同第 1 步。

12. 變性：同第 2 步，只是時間縮短到 30 分鐘。

13. 配制轉膜液：不需配制，直接用變性液轉膜。

14. 其余處理同第 4 步到第 10 步。

三：Northern 印跡膜的制備（RNA 轉膜）

15. 按常規(guī)方法進行電泳，本試劑盒不提供電泳所需試劑。本方法適用于甲醛變性膠和乙二醛變性膠，電泳后和熒光標尺并排拍照。

16. 凝膠不需要變性和洗膠處理（也不能變性，否則 RNA 將會降解），電泳后直接進入轉膜步驟，完全按第 6 到第 10 步處理。