大提柱式質(zhì)粒DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒是用于質(zhì)粒 DNA 大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過(guò)離心吸附柱，專一結(jié)合 DNA，后洗去雜質(zhì)，高效快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在 30 分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從 50-100 mL 過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)300-500 ug的高純度質(zhì)粒DNA（OD260/OD280= 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及 PCR 等。

1．快速、步驟少，整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。

2．純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間。

3．產(chǎn)量高，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到 2-5 ug/mL。

4．用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。

5．價(jià)格低，比多數(shù)國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝
柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 A 60205a 26 mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 B 60205b 26 mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 C 60205c 36 mL RNase A 溶液（10mg/mL） 3160 0.6 mL 大提離心吸附柱 90303 5 套 通用洗柱液 60408 100 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 80912sc 1 份

運(yùn)輸及保存 RNase A 溶液需要低溫運(yùn)輸、-20℃保存，其余成分可常溫運(yùn)輸、室溫保存，如有沉淀可加熱溶解后再使用。

自備試劑 無(wú)。

使用方法 1. 用 250 mL 離心管收集 100-300 mL 菌液，5000 rpm 離心 10 分鐘，去

除上清。

2. 往細(xì)菌沉淀中加入 5 mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 A，充分振蕩懸?。ㄒ淮问褂脮r(shí)需要將 RNase A 溶液全部加入到溶液 A 中并混合均勻，未用完的、含 RNase A 的溶液 A 需放 4℃保存）。注意：充分重懸細(xì)胞沉淀使之無(wú)細(xì)胞結(jié)塊狀物對(duì)于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。

3. 加入 5 mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 B，溫和翻轉(zhuǎn) 10 余次至藍(lán)色變得均勻。室溫放置 5-10 分鐘裂解細(xì)菌。注意: 避免劇烈振蕩，否則細(xì)菌基因組 DNA將斷裂為小片段，與質(zhì)粒難以分離，污染質(zhì)粒 DNA。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會(huì)進(jìn)入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的堿，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍(lán)色，則表示變質(zhì)，應(yīng)該棄之不用并且速跟廠家聯(lián)系。

4. 加入冰浴的 7mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 C，顛倒混勻，此時(shí)混合液應(yīng)該從藍(lán)色變成無(wú)色，如果不發(fā)生顏色變化，則表示柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 C變質(zhì)，需要聯(lián)系廠家。將混合液冰上放置 10 分鐘，將有白色絮狀物形成。注意不要過(guò)分振蕩。

5. 6000 rpm 離心 10 分鐘。如果離心管承受能力強(qiáng)，離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。

6. 將上清液（約 20 mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，放入 50 mL 套管中。由于此時(shí)的溶液比重較大，部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常，吸取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀物即可。

7. 6000 rpm 離心 5 分鐘，質(zhì)粒 DNA 將與離心吸附柱中的膜結(jié)合。棄穿透液。

8. 將 10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm離心 5 分鐘，棄穿透液。

9. 重復(fù)上步一次，即將 10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置 2分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘，棄穿透液。

10.室溫 6000 rpm 空甩 5 分鐘，棄穿透液。注意：此步對(duì)去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會(huì)影響 DNA 的使用。

11.將離心吸附柱放入一個(gè)自備的、干凈的 50 mL 塑料離心管中，加 0.5 mLDNA 洗脫液 2.0（洗脫液如加熱到 50-65℃效果更佳），室溫靜置 2 分鐘后 6000rpm 離心 5 分鐘，收集液即是質(zhì)粒 DNA 溶液。

12.本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強(qiáng)，所以再用 1 mL DNA 洗脫液 2.0洗脫 3-4 次才能把絕大部分質(zhì)粒 DNA 洗脫下來(lái)。得到的 RNA 可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果 DNA 洗脫液不夠，可以用自備的 DEPC 水代替。注：一般情況下，一次洗脫可以洗脫約 25%的質(zhì)粒DNA；第二次洗脫可以洗脫約 35%的質(zhì)粒 DNA；第三次洗脫可以洗脫約20%的質(zhì)粒 DNA；第四次洗脫可以洗脫約 10%的質(zhì)粒 DNA；第五次洗脫可以洗脫約 8%的質(zhì)粒 DNA。

13.合并所得質(zhì)粒 DNA，立即使用或-20℃儲(chǔ)存。如果需要使用液相內(nèi)毒素清除劑清除質(zhì)粒 DNA 中的內(nèi)毒素，可以直接將此步所得的 DNA 溶液用于去內(nèi)毒素處理。如果 DNA 濃度太低，可以另購(gòu)本公司的核酸濃縮劑進(jìn)行濃縮。