柱式細(xì)菌DNAout

產(chǎn)品及特點

本產(chǎn)品是在基因在天凈沙細(xì)菌 DNAOUT 基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式升級產(chǎn)品，可以用于絕大多數(shù)革氏陽性和陰性細(xì)菌基因組 DNA 的快速提取。

1. 操作簡單，整個過程不到 20 分鐘。

2. 產(chǎn)率一般在 5-20 ug/mL 過液培養(yǎng)的飽和菌液（108-109個細(xì)胞）。

3. OD260/280 一般在 1.8 以上，可直接用于 PCR、酶切、雜交等實驗。

4. DNA 片段長度一般在 40-50 Kb 左右。

5. 每次提取可以處理 0.1-1.5 mL 的細(xì)菌，也可以使用菌落。

6. 價廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價格便宜。

7. 安全無毒，本試劑盒對人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝 
溶菌酶干粉 100406 600 mg 溶液 A 60802A 15 mL 溶液 B 60802B 7.5 mL 溶液 C 60802C 30 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊 60802sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸及保存（溶菌酶干粉需要 4℃或-20℃保存），有效期一年。 

自備試劑 氯仿、自備無菌水。

使用方法注意：溶液 A 和溶液 B 容易產(chǎn)生沉淀，溶液 B 十分粘稠，均需要放置在 65℃預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。

一: 對革氏陰性細(xì)菌樣品， 不需用溶菌酶

1. 將 0.1-1.5 mL 過夜培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中， 12,000 rpm室溫離心 1 分鐘沉淀細(xì)菌，棄上清。

2. 加入 300 uL 預(yù)熱的溶液 A 到細(xì)菌沉淀中，充分吹打均勻。

3. 再加入 150 uL 預(yù)熱的溶液 B 到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。由于溶液 B 比較粘稠，可以采取稱量方法取用，150uL 約等于 150-160 mg。也可以將 1 mL 槍頭剪去一截再吸取。

4. 65℃放置 3-5 分鐘。如果室溫放置，DNA 產(chǎn)量會降低 10-20%。

5. 加入 200 uL 自備氯仿，震蕩混勻 10-30 秒，此時溶液將呈乳白色。

6. 12,000 rpm 室溫離心 2 分鐘。此時上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個新的 1.5 mL 塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。

7. 加入 1.5 倍體積(約 0. 7 mL)的溶液 C，顛倒混勻后全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置至少 2 分鐘。

8. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，DNA 將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。

9. 將 0.5 mL 通用洗柱液加入離心柱中，12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄穿透液。

10. 重復(fù)上步操作一次。

11. 空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的 1.5 mL 離心管中。

12. 加 50-100 uL 通用洗脫液，室溫放置 3-5 分鐘。

13. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘即得 DNA 溶液。

14. 由于本產(chǎn)品使用的離心吸附柱吸附 DNA 的能力較強(qiáng)，可以重復(fù)上步操作一次以便得到更多的 DNA。

15. 直接取 5-10 uL 電泳檢測 DNA，其余放冰箱備用。

二: 對革氏陽性細(xì)菌樣品，需用溶菌酶

1. 將 0.1-1.5 mL 過夜培養(yǎng)的革氏陽性細(xì)菌 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘后, 重懸于 0.6 mL 溶菌液中（溶菌液配制:30 mL 無菌水+600 mg 溶菌酶，配制后好分裝成小管并放-20℃長期保存，每次只用一小管)，顛倒混勻 5-10 次后放 37℃保溫至少 30 分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長時間，需要自己根據(jù)不同的細(xì)菌摸索)。

2. 12,000 rpm 室溫離心 10 分鐘，小心棄上清。

3. 后續(xù)處理接上面的革氏陰性細(xì)菌提取步驟中的第 2 步。

三: 其他注意事項

1. 可以直接使用細(xì)菌菌落提取 DNA，操作時直接將細(xì)菌菌落挑入到溶液 A 中，后續(xù)操作同上。

2. 從單個菌落中提取到的 DNA 較少，所以只用 30 uL 通用洗脫液洗脫。