柱式土壤DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是本公司土壤 DNAOUT（CAT：60701）的柱式升級(jí)產(chǎn)品，專(zhuān)門(mén)用于從各種土壤樣品和河海沉積物中提取高質(zhì)量的 DNA 的試劑。跟土壤 DNAOUT 相比它具有下列特點(diǎn)：

1. 去污染效果更好，得到的 DNA 可以直接作為 PCR 模板或酶切，不需要再進(jìn)行去腐殖酸處理。

2. 操作過(guò)程更加簡(jiǎn)單快速，整個(gè)操作只需要 10 多分鐘，擴(kuò)容性好。

3. 產(chǎn)量高，每克土壤一般可以提取到 5-50 ug DNA，片段長(zhǎng)度在 20-50 Kb，

D260/280 一般都在 1.8 以上。

4. 適合于各種土壤（包括河海沉積物）。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
柱式土壤 DNAout 溶液 A 71205a 25 mL 柱式土壤 DNAout 溶液 B 71205b 25 mL A 型通用上柱液 181001 40 mL 離心吸附柱（廣口） 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 71205sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，保存期為一年。

自備試劑 氯仿。

使用方法 

1. 65℃預(yù)熱柱式土壤 DNAout 溶液 A，待其沉淀溶化后充分混勻，取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料離心管中并放置于 65℃待用。

2. 稱(chēng)取 0.1-0.3 g 的土壤，加入到裝有預(yù)熱的柱式土壤 DNAout 溶液 A 的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩 5-10 分鐘。如果是擴(kuò)量操作，可以使用更多土壤和較大離心管。也可以將同一種土壤在較大離心管中震蕩處理，然后再分到 1.5 mL離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管，一定要讓管底的土壤震蕩起來(lái)。

3. 將離心管置于 65℃水浴中保溫至少 5 分鐘。

4. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色，實(shí)際顏色取決于腐殖酸的含量，上清液的體積一般為300-400 μL)。

5. 在上清液中加入等體積的柱式土壤 DNAout 溶液 B，上下顛倒 30 秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。 

6. 將離心管冰浴至少 5 分鐘。

7. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的 1.5 mL 離心管中，上清液顏色將比第 4 步得到的上清的顏色稍淡，體積在 0.7 mL 左右。 

注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接進(jìn)入第 10 步，但 DNA 的產(chǎn)量會(huì)低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接進(jìn)入第 10 步，則轉(zhuǎn)移的溶液體積不要超過(guò) 0.6 mL，否則沒(méi)有空間加 A 型通用上柱液。 

8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩 30 秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來(lái)。

9. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到新離心管中。說(shuō)明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機(jī)相部分顏色較深，一般呈淡棕色。上清的顏色取決于土壤中腐殖酸的含量。將上清轉(zhuǎn)移到新的 1.5 mL 離心管時(shí)，不要超過(guò) 0.6 mL，否則沒(méi)有空間加溶液 C。如果有多余的可以棄之不用。

10. 加入 1.5 倍體積的 A 型通用上柱液，上下顛倒 30 秒混勻。

11. 分兩次上柱（即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，12000-15000g 室溫離心半分鐘，棄穿透液）。

12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

13. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。增加一步洗滌能使最后得到的 DNA 的純度稍有提高。

14. 12000-15000 g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)污染 DNA。

15. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50uL DNA 洗脫液

2.0。

16. 室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。

17. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為提取到的 DNA 樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。