柱式水樣DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

水樣中含有 0.2um 可過濾物（主要是病毒 DNA 和裸露的 DNA 片段）和不可過濾物（主要是細(xì)菌、真菌等微生物）。本產(chǎn)品提取水樣 DNA 的原理是過濾得到兩部分，然后分別提取。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 本產(chǎn)品足夠 15 次可過濾部分和 15 次不可過濾部分的提?。ü?30 次），可過濾部分的提取一次可以處理 50mL 的水樣。不可過濾部分的提取一次可以處理 50mL-5L 的水樣。

2. 操作簡單，整個過程室溫操作約 40 分鐘，適合大規(guī)模樣品處理。

3. 安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

4. 由于水樣所含 DNA 很少，所以得到的 DNA 一般不能用于電泳檢測，只能用于 PCR 檢測或其他擴(kuò)增檢測。

5. 性價(jià)比高，質(zhì)量和國外同類產(chǎn)品相當(dāng)，但價(jià)格更便宜。 
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大扁盒包裝 
水樣 DNA 濃縮液 LM101112a 23 mL（棕色瓶） 水樣 DNA 洗滌液 LM101112b 250 mL 水樣 DNA 溶解液 LM101112c 9 mL×2 載體 DNA LM101112d 1.5 mL 酸洗玻璃珠（800um） LM100307D 10g 上柱結(jié)合液 LM190602 15 mL×2 硅膠膜離心吸附柱（窄口） 170606 15 套×2 通用洗柱液 60408 15 mL×2 DNA 洗脫液 3.0 170603 10 mL 使用手冊 101112sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，水樣 DNA 裂解液長期（1 月以上）放置時(shí)需要放 4℃，有效期一年。DNA 載體需要低溫運(yùn)輸，-20℃保存。

自備試劑

0.22um 濾膜和濾器、250mL 塑料瓶、50mL 塑料離心管、15mL 塑料離心管、1.5mL 塑料離心管 

使用方法 

一：水樣的過濾

1. 如果需要提取水樣的可過濾部分的 DNA，則需要用自備的 0.22um 濾膜和濾器一次過濾 50mL 水樣，棄濾膜，穿透部分直接用方法一提取 DNA。

2. 如果需要提取水樣的可過濾部分的 DNA，則需要用自備的 0.22um 濾膜和濾器過濾 50mL-5L 的水樣，棄穿透部分，取下濾膜，用 1.5mL 自備超純水洗滌濾膜表面的非過濾物到一培養(yǎng)皿中，再用移液槍將洗脫物轉(zhuǎn)移到1.5mL 塑料離心管中，15000g 離心 10 分鐘，棄上清，沉淀直接用方法二提取 DNA。

3. 如果不需要分可過濾部分和不可過濾部分的 DNA，則取 50mL 水樣按直接用方法一提取 DNA。

二、提取方法一（可過濾部分的 DNA 提取）

4. 將 50mL 樣品轉(zhuǎn)移到 50mL 塑料離心管中，100℃水浴加熱 10 分鐘以裂解病毒和其他小于 0.2um 的微生物，然后冷卻至室溫。主要不要使用玻璃器皿，因?yàn)椴Ａ?DNA 有非特異性吸附。

5. 加入 0.1 mL DNA 載體，充分顛倒 10 次搖晃均勻。

6. 加入 1.5 mL 水樣 DNA 濃縮液，充分顛倒搖晃 10 次。

7. 室溫靜置 10 分鐘，此步非常關(guān)鍵，不能省略。

8. 8000 rpm 常溫離心 10 分鐘（需要 50mL 臺式離心機(jī)）。

9. 小心移棄上清（一次操作時(shí)，此部分可以保留，以免丟掉 DNA），注意不要觸及管底離心面的 DNA 沉淀（此沉淀也許看不見）。

10. 加入 15 mL 水樣 DNA 洗滌液，震蕩半分鐘混勻后，8000rpm 常溫離心 5分鐘。

11. 小心移棄上清，注意不要觸及管底離心面的DNA沉淀（此沉淀也許看不見）。

12. 在沉淀中加入 0.6 mL 水樣 DNA 溶解液，振蕩 30 秒混勻后。注意：水樣DNA 溶解液在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，如果有沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

13. 加入 0.8mL 上柱結(jié)合液到離心管中，吹打混勻后轉(zhuǎn)移一半的混合液（0.8mL）到硅膠膜離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

14. 13,000 rpm 室溫離心 1 分鐘（需要 1.5mL 臺式離心機(jī)），棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

15. 將剩余的另外一半裂解液（0.8mL）轉(zhuǎn)移到硅膠膜離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘。

16. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

17. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

18. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12,000 rmp 室溫離心 1 分鐘，棄收管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。此為第二次洗滌，可以跳過。

19. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘（干甩），棄含穿透液的離心管。

20. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的 1.5 mL 離心管中，在離心吸附柱的濾膜的中部加入 30 uL DNA 洗脫液 3.0，然后室溫放置 2 分鐘。

21. 12,000 rpm 室溫離心 1 分鐘，離心管中的溶液即為水樣 DNA 溶液。

22. DNA 樣品可以直接用于 PCR 或其他擴(kuò)增，也可放-20℃長期保存。 

三、提取方法二（不可過濾部分的 DNA 提取）

23. 在不可過濾的沉淀中加入 0.6mL 水樣 DNA 溶解液，充分震蕩混勻。

24. 如果有超聲破碎儀，則用超聲破碎儀破碎細(xì)胞，強(qiáng)度根據(jù)所用儀器推薦的針對真菌的強(qiáng)度和頻率。如果沒有超聲破碎儀，則用凍融法加機(jī)械破碎法：加入 100mg 本試劑盒提供的酸洗玻璃珠，充分震蕩 10 分鐘后放-20℃或-80℃凍 5-10 分鐘直到凝固?；瘍龊笤僬鹗?10 分鐘后放-20℃或-80℃凍5-10 分鐘直到凝固。

25. 12000-15000 g 室溫離心 5 分鐘。

26. 將上清轉(zhuǎn)移到新的 1.5mL 新離心管中。

27. 后續(xù)操作接第 13 步。