柱式動物DNAout/KLANG
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蔡經(jīng)理 銷售經(jīng)理
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經(jīng)營模式
生產(chǎn)廠家
所在地區(qū)
上海市閔行區(qū)
柱式動物DNAout
產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品在基因動物 DNAOUT(CAT#:3670)基礎上改良而得的柱式升級產(chǎn)品,主要用于快速提取新鮮或冷凍的動物組織中的基因組 DNA。跟動物 DNAOUT相比,它具有下列特點:
1. DNA 更加純凈,大多數(shù) DNA 樣品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之間。
2. DNA 產(chǎn)率一般在 200ug/g 左右(跟組織種類密切相關(guān))。
3. 可直接用于 PCR、酶切、雜交等后續(xù)反應。
4. 操作更加簡單,離心吸附操作代替離心沉淀,整個過程室溫操作約 10 分鐘,適合大規(guī)模樣品處理。
5. 安全無毒,本試劑盒對人體無毒,無腐蝕性和刺激性氣味。
6. 性價比高,質(zhì)量和國外同類產(chǎn)品相當,但價格更便宜。
規(guī)格及成分 成份 編號 大紙盒包裝
溶液 A LM71206A 40 mL 溶液 B LM71206B 20 mL 溶液 C LM71206C 50 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊 71206sc 1 份
運輸及保存 常溫運輸和保存、有效期一年。
自備試劑 氯仿(也可省略,但產(chǎn)量會降低)
使用方法
注意:溶液 A 容易產(chǎn)生沉淀,溶液 B 十分粘稠,用前均需要在 65℃水浴中加熱使沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分搖勻。
1. 根據(jù)使用材料的不同進行下列操作:
a) 對貼壁細胞:吸盡培養(yǎng)液,在每 10 平方厘米細胞中加入 0.8 mL 預熱的溶液A,用槍充分吹打以確保細胞全部裂解,然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。
b) 對懸浮細胞:離心收集細胞,吸盡液體,在每 1-5×106懸浮細胞中加入 0.8 mL預熱的溶液 A,用槍充分吹打以確保細胞全部裂解。然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 塑料離心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 細胞,0.8 mL 溶液 A的細胞使用量不要超過 1×106 個細胞。
c) 對新鮮或冷凍的組織:先將剪切成小塊的新鮮組織或冷凍保存的組織放入 10mL 或 15 mL 塑料離心管中,每 50-100 mg 組織加 0.8 mL 預熱的溶液 A,用剪切式勻漿器勻漿 30 秒左右,然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。對肝、脾、胰、腎等細胞分裂十分旺盛的組織(細胞中含大量正在復制的 DNA),建議組織的使用量不要超過 50 mg。
d) 對 DNALOCKER 保存組織:先用紙吸去 DNALOCKER 液體后再剪切成小塊,其余操作同新鮮或冷凍組織的處理。
2. 加入 0.4 mL 預熱的溶液 B 到裂解液中。由于溶液 B 十分粘稠,可將 1mL 槍頭剪掉一截再用,也可以用稱量方法加 0.4 g。加入溶液 B 后需要顛倒數(shù)次充分混勻。
3. 65℃水浴 5-10 分鐘。如果室溫放置,DNA 產(chǎn)量將降低 10-20%。
4. 加入 0.2 mL 自備氯仿,振蕩器上充分振蕩混均 30 秒,此時溶液將呈乳白色。一定要確保離心管底的液體被震蕩起來。
5. 12000-15000 g 室溫離心 2 分鐘。上清透明,中間層為白膜(蛋白層)。
6. 小心將上清液平均轉(zhuǎn)移到兩個新的離心管中,避免觸及中間的白膜。
7. 每個管中加入 1.5 倍體積的溶液 C,充分顛倒混勻。
8. 分兩次上柱(即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液,然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液)。
9. 加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液。
10. 加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,12000-15000 g 室溫離心半分鐘,棄穿透液。
11. 12000-15000 g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的通用洗柱液會污染 DNA。
12. 室溫放置半分鐘使殘留乙醇揮發(fā)。
13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中,加入 50-100 uL DNA 洗脫液 2.0,室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。
14. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為 DNA 樣品,可以立即使用或存放于冰箱待用。
采購數(shù)量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
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