柱式藻類(lèi)RNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是基因開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)針對(duì)藻類(lèi) RNA 提取開(kāi)發(fā)的高效 RNA 提取試劑。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：

1. 操作更加簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。

2. RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)藻類(lèi)中的多糖污染。

3. 適用于常見(jiàn)的各種海水和淡水藻類(lèi)的 RNA 提取。

4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。

5. 性?xún)r(jià)比高于進(jìn)口的柱式藻類(lèi) RNA 提取產(chǎn)品。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 A LM71203a 50 mL 柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 B LM71203b 15 mL 柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 C LM71203c 50 mL 離心吸附柱 LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL RNA 洗脫液 LM71207 10 mL 使用手冊(cè) LM71203sc 1 份
注：溶液 B 為淡黃色液體，使用前請(qǐng)觀察顏色是否正常。若溶液 B 有油粒狀顆 粒及分層，屬正?，F(xiàn)象，不影響使用。 

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。

自備試劑 氯仿。 

使用方法

1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 藻類(lèi)（濕重）。注意海水藻類(lèi)需要用純凈水洗滌 2 次以免藻類(lèi)沉淀中殘留的海水鹽分干擾柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 A 的作用。

2. 液氮研磨破碎樣品：取 100-200mg 離心得到的新鮮藻類(lèi)細(xì)胞沉淀放入含液氮的研缽中，迅速將其研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到標(biāo)記的塑料離心管中，加入 1 mL 柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。注意：柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 A 在 4℃放置后容易產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3. 將液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。

4. 在離心管中加入 0.3 mL 的柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自備氯仿，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀（顏色將根據(jù)提取的藻類(lèi)不同而不同）。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來(lái)。

5. 室溫 12000-15000 g 離心 3-5 分鐘，兩相間將有細(xì)胞破碎物。

6. 將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有 DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。好留下100 uL 上清液不取。

7. 加入等體積的柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對(duì)某些含糖量高的藻類(lèi)，屬于正?，F(xiàn)象），千萬(wàn)不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

8. 先將一半的溶液（如果有沉淀，則將一半的懸濁液）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

9. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第 7 步加入柱式藻類(lèi) RNA 提取溶液 C 后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為 0.4、0.3 和 0.3 mL。

11. 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的使用。

12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脫

液，室溫放置 1-2 分鐘。

13. 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶(hù)使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。如果電泳發(fā)現(xiàn) DNA 污染嚴(yán)重（跟樣品相關(guān)）建議使用含有 RNase-free DNase 處理步驟的柱式藻類(lèi)RNAout 2.0 （ CAT#:90404 ）， 也 可 以 另 購(gòu) 膜 結(jié) 合 DNA 清除劑（CAT#90904）。

15. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。

16. RNA 純度測(cè)定：無(wú)污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。