無(wú)氯仿柱式植物RNAout2.0

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是無(wú)酚無(wú)氯仿柱式植物 RNAOUT（CAT#：160906）的升級(jí)產(chǎn)品。經(jīng)過(guò)配方和流程優(yōu)化后，不僅不需要氯仿處理，還解決了提取的植物總 RNA中出現(xiàn)基因組 DNA 污染這一難題，提取的 RNA 通過(guò) PCR 驗(yàn)證不含基因組DNA 污染。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：

1. 免酚和氯仿處理，操作安全可靠。

2. 簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。

3. RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。

4. 目前已測(cè)試過(guò)上百種植物。

5. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。

6. 性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式植物 RNA 提取產(chǎn)品。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
無(wú)氯仿柱式植物 RNAout 溶液 A LM160907A 50 mL 無(wú)氯仿柱式植物 RNAout 溶液 B LM160907B 50 mL 離心吸附柱 LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 100 mL DNase膜反應(yīng)液 90404A 2.5 mL RNase-free DNase（1U/uL） LM90903 0.5 mL RNA 洗脫液 LM71207 10 mL 使用手冊(cè) LM160907sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，膜反應(yīng)液和 DNase 需低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 無(wú)

使用方法 

1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 植物葉片、或 50-100 mg 植物種子、或 200-500 mg 植物果實(shí)。

2. 樣品破碎：

1) 勻漿法：先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在 RNALOCKER 中的植物組織需用紙吸去 RNALOCKER液體后再剪切成小塊)，放入 10-15 mL塑料離心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。

2) 液氮研磨法（適用于復(fù)雜，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入含液氮的研缽中，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到合適的塑料離心管中，加入 1 mL 溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。

注意：溶解溶液 A 沉淀。溶液 A 在 4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用

前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3. 將勻漿物或研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織（比如果實(shí)）含有大量水份，勻漿液會(huì)多于 1 mL，轉(zhuǎn)移時(shí)也只取 1 mL。

4. 室溫 12000-15000 g 離心 3-5 分鐘，管底沉淀為細(xì)胞破碎物。

5. 將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。

6. 加入等體積的溶液 B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對(duì)某些植物，屬于正?，F(xiàn)象），千萬(wàn)不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

7. 將一半的溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

8. 將剩下的一半溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第 7 步加入溶液 B 后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為 0.4、0.3 和 0.3 mL。

10. 12000 rpm 室溫離心 10 秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)抑制后續(xù)反應(yīng)中 DNase 的活性。

11. 將 10 uL（10 U）的 RNase-free DNase 加入到 50 uL 37℃預(yù)熱的 DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成 DNase 工作液。

12. 將 DNase 工作液在 37℃預(yù)熱 1 分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置 5 分鐘。注意：5 分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的 DNA 污染。

如果 DNA 沒(méi)有徹底降解（可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了 DNase 的活性），此步的保溫時(shí)間可以適當(dāng)延長(zhǎng)到 10 分鐘或 15 分鐘。

13. 直接在離心吸附柱中加 0.7 mL 通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。

14. 12000 rpm 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

15. 再加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000 rpm 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

16. 12000 rpm 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇（通用洗

柱液中的成分）會(huì)影響 RNA 的使用。

17. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free 收集管中，加入30-50 uL RNA洗脫液，室溫放置 1-2 分鐘。

18. 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

19. RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。

20. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。

21. RNA 純度測(cè)定：無(wú)污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。