無酚無氯仿柱式植物RNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是在柱式植物RNAOUT（CAT#：71203）的基礎(chǔ)上經(jīng)過配方和流程優(yōu)化得到的無氯仿升級(jí)產(chǎn)品，它結(jié)合了植物RNAout的高效性、快捷性以及無氯仿處理的安全性。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：

1. 免酚和氯仿處理，操作安全可靠。

2. 簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。

3. RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大 多數(shù)植物中的多糖污染。

4. 目前已測(cè)試過上百種植物。

5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交和cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。

6. 性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式植物 RNA 提取產(chǎn)品。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
無酚無氯仿植物 RNA 提取溶液 A LM160906a 50 mL 無酚無氯仿植物 RNA 提取溶液 B LM160906b 50 mL 離心吸附柱（寬口） LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL RNA 洗脫液 LM71207 10 mL 使用手冊(cè) LM160906sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑 無

使用方法 

1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物葉片、或30-50mg 植物種子、或 100-200mg 植物果實(shí)。不能多加，否則容易堵柱。無氯仿提取處理的量比常規(guī)的加氯仿處理量要少一倍，否則非常容易堵柱，但是否堵柱又取決于植物組織的多糖多酚的濃度。

2. 樣品破碎：

1) 勻漿法：先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在 RNALOCKER 中的植物組織需用紙吸

注意：如果不小心將溶液 A 放置在 4℃，則可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3. 將勻漿物或液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織（比如果實(shí)）含有大量水份，勻漿液會(huì)多于 1 mL，轉(zhuǎn)移時(shí)也只取 1 mL。

4. 室溫 12000-15000 g 離心 3-5 分鐘，管底沉淀為細(xì)胞破碎物。

5. 將上清液(約 1 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 2 mL 塑料離心管中。

6. 加入等體積的溶液 B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對(duì)某些植物，屬于正常現(xiàn)象），千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

7. 將 0.7mL 的混合溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，14000-15000 g 室溫離心 3到 5 分鐘，棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒穿透，可以延長(zhǎng)離心時(shí)間直到徹底穿透。

8. 將剩下的混合溶液按每次 0.7mL 的方式轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 每次13000-15000 g 室溫離心 3-5 分鐘，棄穿透液。

9. 由于混合液有 2mL 左右，所以三次轉(zhuǎn)移即可將混合液全部掛柱。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫 13000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒穿透，可以延長(zhǎng)離心時(shí)間直到徹底穿透。

11. 再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫 13000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

12. 12000 rpm 室溫離心 10 秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的使用。

13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脫液，室溫放置 1-2 分鐘。

14. 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

15. RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。

16. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。

17. RNA 純度測(cè)定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。