亞細胞定位公司 洋蔥亞細胞定位專業(yè) 亞細胞定位
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武漢思特進科技發(fā)展有限公司

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武漢思特進科技發(fā)展有限公司主營:動植物,細菌,細胞生物實驗




武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。




分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉(直徑為1 μm),加入滅菌蒸餾水制成金粉懸浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中,邊振蕩邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質(zhì)粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振蕩混勻?;驑孏DS-80轟擊時氦氣罐的氣壓為1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因槍中央,進行轟擊,之后放置25℃避光過夜培養(yǎng),使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。


武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。




目的構建通用型植物GFP標簽蛋白表達載體,研究蛋白質(zhì)的細胞內(nèi)定位對蛋白質(zhì)組學和代謝組學等研究的意義。方法構建2種GFP標簽蛋白質(zhì)表達載體,分別在GFP的N和C端預留位點,以目的基因。利用該基因載體,分別內(nèi)切酶Fok I的切割結構域與MS2噬菌體外殼蛋白MCP的串聯(lián)蛋白(Fok I:MCP:Fok I,FMF)至GFP的N和C端,得到FMF與GFP的融合蛋白GFP:FMF和FMF:GFP,其中FMF的N端帶有細胞核定位信號。利用農(nóng)介導植物瞬時表達侵染本氏和洋蔥表皮細胞,觀察GFP熒光表達情況。結果成功構建了2種融合了目的基因和GFP的表達載體p ER35GFP-FMF和p ER35FMF-GFP。激光共聚焦結果顯示侵染了只含GFP載體的農(nóng)的細胞,可在細胞核和細胞質(zhì)中檢測到GFP的綠色熒光,而侵染了含核定位信號FMF:GFP和GFP:FMF 2種融合蛋白載體的農(nóng)的細胞,只在細胞核中觀察到綠色熒光。結論該載體系統(tǒng)可運用于研究蛋白質(zhì)在植物細胞中的亞細胞定位,具有簡單、和通用性的特點。


武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。





重金屬轉(zhuǎn)運蛋白P-type ATPase(HMA)已被證實參與植物體內(nèi)的重金屬運輸,HMA5主要參與銅的轉(zhuǎn)運。在模式植物擬南芥、水稻和黃瓜中對HMA5基因進行了較多的研究,但是對豆科植物HMA5的研究鮮見報道。實驗室前期在天藍苜蓿中分離到一個與銅脅迫及共生結瘤相關的HMA5基因,為了對此類基因在豆科植物共生結瘤中的作用進行深入研究,本研究對全基因組已測序的模式豆科植物蒺藜苜蓿的基因組進行篩查,尋找HMA5同源基因并通過表達模式分析初步判斷其與共生結瘤的關系,在此基礎上,以其中的MTR_8g079250基因為對象,進行亞細胞定位、組織表達、RNA干擾和過量表達等研究,初步鑒定該基因在共生結瘤中的功能。1、MTR_8g079250的亞細胞定位構建MTR_8g079250的洋蔥表皮亞細胞定位載體,通過基因槍轟擊轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細胞,在激光共聚焦顯微鏡下觀察到MTR_8g079250::GFP融合蛋白主要在細胞膜上表達,在細胞核上也有微量的表達;構建MTR_8g079250的葉片亞細胞定位載體,通過根癌農(nóng)介導注射葉片的方式進行轉(zhuǎn)化,結果表明目的基因主要定位在細胞膜和細胞核上;2、MTR_8g079250的組織表達構建PMTR_8g079250::GUS融合表達載體,通過農(nóng)發(fā)根轉(zhuǎn)化的方式轉(zhuǎn)入蒺藜苜蓿根部,經(jīng)培養(yǎng)后,進行GUS染色觀察。

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聯(lián)系賣家 夏經(jīng)理 (QQ:81680037)
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