武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物，細(xì)菌，細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期發(fā)展起來(lái)的一種非放6射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類(lèi)產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究等許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用熒光標(biāo)記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸?？捎脽晒鈽?biāo)記的探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而對(duì)基因進(jìn)行染色體定位。

原位雜交中探針的選擇

DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過(guò)不同的酶促分子反應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記。寡核苷酸探針的長(zhǎng)度較短，因此避免了探針內(nèi)部退火的問(wèn)題，在雜交時(shí)的滲透能力也更好，探針與靶標(biāo)的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時(shí)需要控制探針片段長(zhǎng)度，通常300-1000bp左右，能覆蓋到較長(zhǎng)片段的靶核酸序列，增加檢測(cè)的靈敏度。

就DNA探針和RNA探針的比較，DNA探針在雜交過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能，也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體，從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用，將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。

Tips：RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性，其檢測(cè)特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進(jìn)行轉(zhuǎn)率合成。通過(guò)PCR擴(kuò)增的方法，可以更方便地進(jìn)行RNA探針的制備；RNA探針合成后，還需驗(yàn)證其對(duì)目標(biāo)片段檢測(cè)的靈敏度和特異性。