玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)
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玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)
玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)
玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒-PCR定量檢測(cè)

價(jià)格

訂貨量(盒)

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≥1

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上海康朗生物科技有限公司

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商品參數(shù)
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商品介紹
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主要組成成分 2×qPCR MagicMix, 熒光 PCR 專用模板稀釋液, PCR 引物混合物,PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL),DNA 病毒裂解液,說(shuō)明書
貨號(hào) KL14-99177
性狀 水劑
規(guī)格 50T
貯藏 -20℃保存
有效期 一年
貨期 現(xiàn)貨
價(jià)格 2490
產(chǎn)品及特點(diǎn) 具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)。
品牌 康朗生物/KALANG
商品介紹

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒 

                     

                        Flos rosae rugosae

產(chǎn)品及特點(diǎn) 

熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測(cè)方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物;而非特異性檢測(cè)方法是在在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量熒光染料,熒光染料特異性地?fù)饺?/font>DNA雙鏈后,發(fā)射出熒光信號(hào)。前者由于增加了探針的識(shí)別步驟,特異性更高,但后者則簡(jiǎn)便易行,為此本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的玫瑰花染料法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒。

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):

1.隨時(shí)可用。

2.優(yōu)化的緩沖液可增強(qiáng)特異性并減少引物二聚體的形成。

3.高靈敏度,特異性和可靠性。

4.為不同的qPCR儀器提供了被動(dòng)參考染料。

產(chǎn)品名稱

方法

規(guī)格

價(jià)格

玫瑰花LAMP試劑盒

LAMP

50

2490

玫瑰花PCR鑒定試劑盒

PCR

50

1490

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50

2490

玫瑰花探針?lè)晒舛?font face="Calibri">PCR試劑盒

探針?lè)?/span>

50

3490

它具有下列特點(diǎn):

1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據(jù)玫瑰花保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。

3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。

4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠 50 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。

6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分

成分

編號(hào)

十孔盒包裝

2×qPCR MagicMix

A

500μL(棕色管)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

B

1 mL(黃蓋)

玫瑰花PCR 引物混合物

C

100μL(白蓋)

玫瑰花 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL)

D

50μL(紅蓋)

DNA 病毒裂解液(試用裝)

E

15 次(9 mL

使用手冊(cè)

F

1

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。

自備試劑 DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒使用方法 

一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 76,54,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。

4. 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

 

二、樣品DNA的制備 

8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL上步制備的PCR 陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5拷貝/μL10μL 相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送15次一管式病毒DNAout。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)

10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)

樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):

成分

樣品管

N+2 個(gè)

PCR 陰性

對(duì)照管

PCR 陽(yáng)性

對(duì)照管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

10 μL

10 μL

10 μL

玫瑰花 PCR

引物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

2 μL

自備 10×ROX (見(jiàn)注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 待測(cè)樣品 DNA 模板

6 μL

不加

不加

7 步所得 PCR 陽(yáng)性對(duì)照稀釋液(2-7 號(hào))

不加

不加

6μL2 號(hào)樣到

2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3

號(hào)管…)

:ABI75007700 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,其他熒光PCR儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。

12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

92

5 分鐘

PCR 反應(yīng)(35 個(gè)循環(huán))

94

60

50

60

72

60

13. 數(shù)據(jù)采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí),最大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的最大吸收光譜在 500 nm,最大發(fā)射光譜在 530 nm。信號(hào)采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。

 

四、數(shù)據(jù)處理

14. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值,再推算出其濃度。

15. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。

 

五、熒光定量PCR技術(shù)的基礎(chǔ)理論

1、熒光定量PCR線性關(guān)系成立的條件分析 、熒光定量PCR線性關(guān)系成立的條件分析。

左圖橫坐標(biāo)是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是總的熒光強(qiáng)度Rn,改圖反映的是各個(gè)樣品隨著 左圖橫坐標(biāo)是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是總的熒光強(qiáng)度Rn,改圖反映的是各個(gè)樣品隨著 每輪PCR反應(yīng),其總的熒光量的實(shí)時(shí)變化;右圖橫坐標(biāo)也是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是 每輪PCR反應(yīng),其總的熒光量的實(shí)時(shí)變化;右圖橫坐標(biāo)也是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是 總的熒光強(qiáng)度與熒光本底的差值RT RB即△Rn的對(duì)數(shù),在右圖中確定閾值線,該直 總的熒光強(qiáng)度與熒光本底的差值RT RB即△Rn的對(duì)數(shù),在右圖中確定閾值線,該直 線上所有樣品的RT RB的對(duì)數(shù)都相同,熒光定量PCR的線性關(guān)系才會(huì)成立。 線上所有樣品的RT RB的對(duì)數(shù)都相同,熒光定量PCR的線性關(guān)系才會(huì)成立。

聯(lián)系方式
公司名稱 上海康朗生物科技有限公司
聯(lián)系賣家 蔡經(jīng)理 (QQ:3002763590)
電話 ῧῨῡ-ῠῡῥῥῢῨῧῢ
手機(jī) ῡῢῨῡῦῦῤῨῢῨῡ
網(wǎng)址 https://www.shklsw.net
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