ELISA檢測概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱：小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱：Mouse Phospholipidase A2, PL-A2 Elisa Kit
貨號：BH-H8454
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關液體（本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途）
     小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
BE(2)-M17(人神經(jīng)母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細胞;PA317氯羥喹（標準品）Clioquinol質(zhì)量規(guī)格：HPLC含量測定

人心臟成纖維細胞HCF硫酸沙丁胺醇（標準品）Albuterol sulfate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

IL2RG Others Rat 大鼠 IL2RG / CD132 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸普拉睪酮鈉（標準品）Dehydroepiandrosterone-3-sulfate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

大鼠腸靜脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL撲米酮（標準品）Primidone質(zhì)量規(guī)格：檢查

SUP-B15人Ph+急淋白血病細胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS葡萄糖酸鋅（標準品）Zinc gluconate質(zhì)量規(guī)格：檢查
SERPINI1 Others Human 人 SERPINI1 人細胞裂解液 (陽性對照) 十四烷(Standard for GC,>99%(GC))質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99%(GC)Tetradecane

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-11酸三丁酯(standard for GC,>99.5%)質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%Tributyl phosphate

ACO2 Others Mouse 小鼠 ACO2 / Aconitase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 熒光桃紅B,酸性紅92質(zhì)量規(guī)格：ARPhloxine B

CL-0017A673(人橫紋肌瘤細胞)5×106cells/瓶×2依萊鉻紅B質(zhì)量規(guī)格：AREriochrome Red B

QBC-939, 人膽管癌細胞 腎癌(瘤株),Ke-3細胞 HL-60(急性粒細胞白血病細胞)固紅RL質(zhì)量規(guī)格：>90%,BRFast Red RL Salt
小鼠磷脂酶A2(PL-A2)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒Hs68(人男性正常細胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸氨溴索(標準品)質(zhì)量規(guī)格：含量測定Ambroxol HCl

4T1(小鼠癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H067人腎系膜細胞完全培養(yǎng)基100mL 人心肝成纖維細胞RNAHCF miRNA5 μg氨1汀（三水）質(zhì)量規(guī)格：干品Purity≥98.0%Amifostine

CM-R071大鼠輸尿管上皮細胞完全培養(yǎng)基100mLG2(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAflatoxin G2

XCL1 Others Canine 狗 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 茜素黃R鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：Ind GradeAlizarin yellow R ,  salt

大鼠間充質(zhì)干細胞-骨髓RMSCD-阿洛糖(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRALL, D-Allose
人Butt瘤細胞;RAJI 大鼠氣管和支氣管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27（6-27），人，雞，小鼠，豬，大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPACAP-27 (6-27) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)

胃癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38（16-38），人，雞，小鼠，綿羊，豬，大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPACAP-38 (16-38) (human,chicken, mouse, ovine,porcine, rat)

IZUMO4 Others Human 人 IZUMO4 / C19orf36 人細胞裂解液 (陽性對照) 垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽相關肽（1-29），大鼠質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPACAP-Related Peptide (1-29)(rat)

大鼠膀胱平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL胰多肽，人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRPancreatic Polypeptide,human

NR8383大鼠肺泡巨噬細胞 Alveolar macrophages of NR8383 rats F12K培養(yǎng)基(SIGMA)+20%FBS川續(xù)斷皂苷乙（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Dipsacoside B