上海康朗生物科技有限公司
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主營(yíng)產(chǎn)品: 生化試劑, 標(biāo)準(zhǔn)品, ELISA試劑盒, 化學(xué)試劑, 分析試劑
中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR試劑盒-PCR定量檢測(cè)
價(jià)格
訂貨量(盒)
¥2490.00
≥1
¥2290.00
≥5
店鋪主推品 熱銷(xiāo)潛力款
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經(jīng)營(yíng)模式
生產(chǎn)廠家
所在地區(qū)
上海市閔行區(qū)
主營(yíng)產(chǎn)品
中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn):
熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類(lèi)和非特異類(lèi)兩類(lèi),特異性檢測(cè)方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物;而非特異性檢測(cè)方法是在在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量熒光染料,熒光染料特異性地?fù)饺?/font>DNA雙鏈后,發(fā)射出熒光信號(hào)。前者由于增加了探針的識(shí)別步驟,特異性更高,但后者則簡(jiǎn)便易行,為此本公司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒。
中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì):
1.隨時(shí)可用。
2.優(yōu)化的緩沖液可增強(qiáng)特異性并減少引物二聚體的形成。
3.高靈敏度,特異性和可靠性。
4.為不同的qPCR儀器提供了被動(dòng)參考染料。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 方法 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
中間普雷沃菌LAMP試劑盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
中間普雷沃菌PCR鑒定試劑盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
中間普雷沃菌探針?lè)晒舛?font face="Calibri">PCR試劑盒 | 探針?lè)?/span> | 50次 | 3490元 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)中間普雷沃菌保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格及成分
成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝 |
2×qPCR MagicMix | A | 500μL(棕色管) |
熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液 | B | 1 mL(黃蓋) |
中間普雷沃菌PCR 引物混合物 | C | 100μL(白蓋) |
中間普雷沃菌 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL) | D | 50μL(紅蓋) |
DNA 病毒裂解液(試用裝) | E | 15 次(9 mL) |
使用手冊(cè) | F | 1 份 |
運(yùn)輸及保存: 低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 :DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。
中間普雷沃菌染料法熒光定量PCR試劑盒使用方法
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL上步制備的PCR 陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為 1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5拷貝/μL,10μL 相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送15次一管式病毒DNAout。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)
樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | PCR 陽(yáng)性 對(duì)照管(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix (棕色管) | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
中間普雷沃菌 PCR 引物混合液(白蓋) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
自備 10×ROX (見(jiàn)注) | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 待測(cè)樣品 DNA 模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
第 7 步所得 PCR 陽(yáng)性對(duì)照稀釋液(2-7 號(hào)) | 不加 | 不加 | 各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…) |
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,其他熒光PCR儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。
12. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR(具體PCR參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化)。
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 92℃ | 5 分鐘 |
PCR 反應(yīng)(35 個(gè)循環(huán)) | 94℃ | 60 秒 |
50℃ | 60 秒 | |
72℃ | 60 秒 |
13. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時(shí),最大吸收光譜在 471 nm,結(jié)合 DNA 時(shí)的最大吸收光譜在 500 nm,最大發(fā)射光譜在 530 nm。信號(hào)采集可以設(shè)置在復(fù)性或延伸步驟。
四、數(shù)據(jù)處理
14. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值,再推算出其濃度。
15. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。
五、熒光定量PCR技術(shù)的基礎(chǔ)理論 :
1、熒光定量PCR線性關(guān)系成立的條件分析 、熒光定量PCR線性關(guān)系成立的條件分析。
左圖橫坐標(biāo)是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是總的熒光強(qiáng)度Rn,改圖反映的是各個(gè)樣品隨著 左圖橫坐標(biāo)是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是總的熒光強(qiáng)度Rn,改圖反映的是各個(gè)樣品隨著 每輪PCR反應(yīng),其總的熒光量的實(shí)時(shí)變化;右圖橫坐標(biāo)也是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是 每輪PCR反應(yīng),其總的熒光量的實(shí)時(shí)變化;右圖橫坐標(biāo)也是PCR循環(huán)次數(shù),縱坐標(biāo)是 總的熒光強(qiáng)度與熒光本底的差值RT RB即△Rn的對(duì)數(shù),在右圖中確定閾值線,該直 總的熒光強(qiáng)度與熒光本底的差值RT –RB即△Rn的對(duì)數(shù),在右圖中確定閾值線,該直 線上所有樣品的RT RB的對(duì)數(shù)都相同,熒光定量PCR的線性關(guān)系才會(huì)成立。 線上所有樣品的RT –RB的對(duì)數(shù)都相同,熒光定量PCR的線性關(guān)系才會(huì)成立。
采購(gòu)數(shù)量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
驗(yàn)證碼不正確