ELISA檢測概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱：小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱：Mouse eosinophil chemotactic factor, ECF Elisa Kit
貨號：BH-H8094
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標(biāo)儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途）
     小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
4-Aminosalicylic acid  中文名：4-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3    軟水硬度測定試劑盒   Water hardness determination kit

4-Amino-N-methylbenzamide  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O    氮快速測試盒    niogen rapid test case              

4-Aminohippuric acid  中文名：4-氨基馬尿酸  分子式：C9H10N2O3    亞鹽測定試劑盒（比色法）

4-Aminobutyric acid  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2    糖化血清蛋白（GSP）測定試劑盒（果糖胺法）（帶標(biāo)準(zhǔn)）

4-Aminobenzophenone  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO    糖化血清蛋白（GSP）測定試劑盒（果糖胺法）（帶標(biāo)準(zhǔn)）
三0酸腺苷酶   英文名稱：   Adenosine iphosphate   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ATP  3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole  16691-43-3  中文名：3-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑  分子式：C2H4N4S  度：98.0%   

三0酸脫氧核苷酸混合溶液   10x0.5ml  Amoxapine  中文名：阿莫沙平  分子式：C17H16ClN3O  度：98.0%

三(羥甲基)基鹽酸鹽   100g  3-Amino-4-methylbenzamide  19406-86-1  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%   

腮腺炎病毒(MuV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  3-Amino-4-hydroxybenzoic acid  1571-72-8  中文名：3-氨基-4-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

瑞氏－姬姆薩復(fù)合染液   Vascular permeability test solion  3-Amino-3-phenylpropionic acid  614-19-7  中文名：C9H11NO2  分子式：C9H11NO2  度：98.0%
小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒4-Aminosalicylic acid  中文名：4-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3    軟水硬度測定試劑盒   Water hardness determination kit

4-Amino-N-methylbenzamide  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O    氮快速測試盒    niogen rapid test case              

4-Aminohippuric acid  中文名：4-氨基馬尿酸  分子式：C9H10N2O3    亞鹽測定試劑盒（比色法）

4-Aminobutyric acid  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2    糖化血清蛋白（GSP）測定試劑盒（果糖胺法）（帶標(biāo)準(zhǔn)）

4-Aminobenzophenone  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO    糖化血清蛋白（GSP）測定試劑盒（果糖胺法）（帶標(biāo)準(zhǔn)）
三0酸腺苷酶   英文名稱：   Adenosine iphosphate   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ATP  3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole  16691-43-3  中文名：3-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑  分子式：C2H4N4S  度：98.0%   

三0酸脫氧核苷酸混合溶液   10x0.5ml  Amoxapine  中文名：阿莫沙平  分子式：C17H16ClN3O  度：98.0%

三(羥甲基)基鹽酸鹽   100g  3-Amino-4-methylbenzamide  19406-86-1  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%    

腮腺炎病毒(MuV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  3-Amino-4-hydroxybenzoic acid  1571-72-8  中文名：3-氨基-4-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

瑞氏－姬姆薩復(fù)合染液   Vascular permeability test solion  3-Amino-3-phenylpropionic acid  614-19-7  中文名：C9H11NO2  分子式：C9H11NO2  度：98.0%