ELISA檢測(cè)概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱：人細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA
英文名稱：Human Cyclin-D2 Elisa Kit
貨號(hào)：BH-H6601
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標(biāo)儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實(shí)驗(yàn)室科研及非臨床用途）
     人細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
Ac-RLR-AMC  Z-GGL-β NA  Pyr-PR-pNA  Orexin B (human)  Ovalbumin (323-339)(chicken, japanese quail)

Ac-Nle-Pro-Nle-Asp-AMC  Z-GGL-pNA  Pyr-Val-OH  (Ala11,D-Leu15)-Orexin B(human)  Ovalbumin (358-365)(chicken)

Boc-LRR-AMC  Z-LLG-AMC  Obestatin (human)  Orexin B (mouse, rat)  Carbetocin,(Butyryl1,Tyr(Me)2)-1- Carbaoxytocin

Boc-LSTR-AMC  Z-LLG-β NA  Obestatin (rat)  Orphan GPCR SP9155 Agonist P518 (human)  Neuronostatin-13 (human, canine, porcine)

Boc-VGR-AMC  Z-VLR-4Mβ NA  DOTA-(Tyr3)-Octreotate  Orphan GPCR SP9155 Agonist P550 (mouse)  (Des-Bromo)-NeuropeptideB (1-23) (human)
皂土(膨潤(rùn)土)(Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑)  Bentonite  質(zhì)量規(guī)格：Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑 犬透明質(zhì)酸(HA)試劑盒 Canine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit

皂土(膨潤(rùn)土)(Bentone SD-2,適于中高極性溶劑)  Bentonite  質(zhì)量規(guī)格：Bentone SD-2,適于中高極性溶劑 犬透明質(zhì)酸酶1(HAase 1)試劑盒 Canine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit

活性炭粉(AR,200目,粉末狀,褐色)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：AR,200目,粉末狀,褐色 犬透明質(zhì)酸酶2(HAase 2)試劑盒 Canine Hyaluronidase 2,HAase 2 ELISA Kit

活性炭(CP,200目,粉末狀,褐色)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：CP,200目,粉末狀,褐色 犬透明質(zhì)酸酶3(HAase 3)試劑盒 Canine Hyaluronidase 3,HAase 3 ELISA Kit

活性炭顆粒(AR,20-50目)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：AR,20-50目 犬透明質(zhì)酸酶4(HAase 4)試劑盒 Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit

活性炭(電鍍脫色專用,200目,from wood)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：電鍍脫色專用,200目,from wood 犬維生素A(VA)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminA,VAELISAKit 96T/48T

活性炭(催化劑載體專用,8-16目)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：催化劑載體專用,8-16目 犬維生素A(VA)試劑盒 Dog Vitamin A,VA ELISA Kit

活性炭(凈水、氣體化專用,棒,φ1.0mm)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：凈水、氣體化專用,棒,φ1.0mm 犬維生素E(VE)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminE,VEELISAKit 96T/48T

活性炭(凈水、氣體化專用,10-24目)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：凈水、氣體化專用,10-24目 犬維生素E(VE)試劑盒 Canine Vitamin E,VE ELISA Kit

活性炭(電鍍脫色專用,40-60目,from Nutshell)  Activated charcoal  質(zhì)量規(guī)格：電鍍脫色專用,40-60目,from Nutshell 犬維生素K1(VK1)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineVitaminK1,VK1ELISAKit 96T/48T
人細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISAStavudine  3056-17-5  中文名：司他夫定  分子式：C10H12N2O4    HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASAELISAKit 人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Albendazole  54965-21-8  中文名：阿苯達(dá)唑  分子式：C12H15N3O2S    Humancytokeratin20,CK-20ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白20(CK-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine  175291-56-2  中文名：Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯  分子式：C26H26NO8P    組織HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次

8-Phenyloctanol  10472-97-6  中文名：8-苯基辛醇  分子式：C14H22O    HumanPlateletFactor4,PF-4ELISAKit人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

8-Phenyloctanoic acid  26547-51-3  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2    兔子脂聯(lián)素(ADP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Deoxycholic acid  83-44-3  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4    Human neonatal thyroid stimulating hormone (N-TSH) ELISA Kit 人新生兒促甲狀腺素(N-TSH)ELISA試劑盒

Timosaponin AIII  41059-79-4  中文名：知母皂苷AIII  分子式：C39H64O13    Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit 人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Diosgenin  512-04-9  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3    HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA試劑盒人腺來(lái)源的內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Sarsasapogenin  126-19-2  中文名：菝葜皂苷元  分子式：C27H44O3    組織PIM2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Makisterone A 20,22-monoacetonide  245323-24-4  中文名：  分子式：C31H50O7    humanPepsinogenA,PG-AELISAKit人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T