武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營：動植物，細(xì)菌，細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司；公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。

目的構(gòu)建通用型植物GFP標(biāo)簽蛋白表達(dá)載體,研究蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)定位對蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)等研究的意義。方法構(gòu)建2種GFP標(biāo)簽蛋白質(zhì)表達(dá)載體,分別在GFP的N和C端預(yù)留位點(diǎn),以目的基因。利用該基因載體,分別內(nèi)切酶Fok I的切割結(jié)構(gòu)域與MS2噬菌體外殼蛋白MCP的串聯(lián)蛋白（Fok I：MCP：Fok I,FMF）至GFP的N和C端,得到FMF與GFP的融合蛋白GFP：FMF和FMF：GFP,其中FMF的N端帶有細(xì)胞核定位信號。利用農(nóng)介導(dǎo)植物瞬時表達(dá)侵染本氏和洋蔥表皮細(xì)胞,觀察GFP熒光表達(dá)情況。結(jié)果成功構(gòu)建了2種融合了目的基因和GFP的表達(dá)載體p ER35GFP-FMF和p ER35FMF-GFP。激光共聚焦結(jié)果顯示侵染了只含GFP載體的農(nóng)的細(xì)胞,可在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中檢測到GFP的綠色熒光,而侵染了含核定位信號FMF：GFP和GFP：FMF 2種融合蛋白載體的農(nóng)的細(xì)胞,只在細(xì)胞核中觀察到綠色熒光。結(jié)論該載體系統(tǒng)可運(yùn)用于研究蛋白質(zhì)在植物細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位,具有簡單、和通用性的特點(diǎn)。

武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司；公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。

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CaNZ是CaN(Calcineurin)基因的正義表達(dá)基因,是在真核生物中存在的一個Ca2+及CaM依賴的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它包括一個催化亞基calcineurin A和一個Ca2+結(jié)合亞基calcineurin B,其催化亞基calcineurin A活性受CaM調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)在篩選再生體系基礎(chǔ)上,利用帶有信號肽和CaM結(jié)合肽的載體,以農(nóng)為媒介將CaN基因?qū)胫?預(yù)期過表達(dá)的融合蛋白將會被分泌到細(xì)胞外并與質(zhì)外體CaM相結(jié)合,抑制質(zhì)外體CaM的功能,從而構(gòu)建出質(zhì)外體CaM的反義植株,觀察質(zhì)外體CaM反義植株的表型改變,為進(jìn)一步開展CaM在植物生長發(fā)育過程中的功能研究提供基礎(chǔ)。 研究結(jié)果如下： (1)以14-16d葉片為外植體,以MS為基本培養(yǎng)基,通過附加配方對比,篩選出適合材料再生的培養(yǎng)基配方：MS+IAA 0.5mg·L-1+6-BA 1.5mg·L-1為芽分化的培養(yǎng)基,1/2MS+NAA0.1mg·L-1為生根培養(yǎng)基。 (2)用Kan進(jìn)行葉片抗性篩選。當(dāng)Kan濃度小于50mg·L-1時,葉片能正常分化出芽；當(dāng)Kan濃度為75mg·L-1時,葉片大多數(shù)白化；當(dāng)Kan濃度超過100mg·L-1時,芽分化停止。所以,以Kan濃度100mg·L-1為葉片分化芽抗性篩選的臨界濃度；而培養(yǎng)物根對較為敏感,Kan 50mg·L-1為篩選臨界值。