1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

樣本采集、存放及運(yùn)輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；

3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

使用方法：

古典豬瘟PCR檢測(cè)試劑盒注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1.樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說(shuō)明書；陽(yáng)性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無(wú)需提取，可直接使用。

2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）

取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽(yáng)性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

PCR反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3’端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

古典豬瘟PCR檢測(cè)試劑盒

蕓香葉苷

大鼠補(bǔ)體片斷*(C*)

磷脂酶D

苯甲氧羰酰琥珀酰亞胺

人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶測(cè)試盒

大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)

人遲現(xiàn)抗原4(VLA4) 

雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)

葡萄糖脫氫酶（GCDH)測(cè)試盒

人血管緊張肽酶A(ATA) 

豚鼠γ干擾素(IFN-γ)

植物鈣調(diào)素(CAM) 

胞苷

人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)

單胺氧化酶(MAO)測(cè)試盒

大鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(STK) 

二胺氧化酶(DAO)測(cè)試盒

漆酶測(cè)試盒

大鼠脫氫表雄酮(DHEA)

人壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE)

L-半胱氨酸鹽酸鹽一水物

人抗單核細(xì)胞抗體(AMA)

酒石黃

人膽酸(CA) 

人多功能蛋白聚糖(VS)

大鼠β-防御素(β-DF)

可溶性果膠（WSP)含量測(cè)試盒

松三糖一水物

人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)

無(wú)水甜菜堿

L-丙氨酸

人丁型肝炎IgG(HDV IgG)

寶石紅蛋白染色試劑

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)

變色酸二鈉鹽

次甲基綠

人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR) 

人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri) 

人游離甲狀腺素(FT4)

雞白介素9(IL-9)

人層連蛋白/板層素(LN) 

大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)

大鼠環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)

大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)

甘油醛-3-磷酸脫氫酶

人牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)

甘氨酸鈣

1,6-二磷酸果糖一鈣鹽

羧肽酶B

二水還原茚三酮

植物銨態(tài)氮測(cè)試盒

雞性腸炎(DEV) 

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF) 

?；D(zhuǎn)移酶（AAT）測(cè)試盒

D-賴氨酸鹽酸鹽

人游離前列腺特異性抗原(fPSA)

人β乳糖蛋白抗體IgG 

人S100B蛋白(S-100B)

兔抑瘤素M(OSM)

人補(bǔ)體片斷*(C*)

大鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)

DL-肉堿鹽酸鹽

尿苷二磷酸葡糖醛酸

人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA) 

魚促黃體

大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)

土壤堿性蛋白酶(S-ALPT)測(cè)試盒