花生PCR檢測試劑盒
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品牌 梵態(tài)
產(chǎn)地 上海
貨號 FT-p620116
含量 詳見說明書
用途范圍 科學(xué)研究
規(guī)格 50T
是否進(jìn)口
商品介紹

1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;

2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;

3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。

主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

產(chǎn)品名稱

花生PCR檢測試劑盒

英文名稱


貨號


樣本采集、存放及運輸:

1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;

2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);

3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運輸。

使用方法:

花生PCR檢測試劑盒注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1.樣本處理(樣本處理區(qū))

待檢樣本的核酸提取可采用RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。

2. 擴增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))

N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣(樣本處理區(qū))

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。

PCR反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

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