1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

樣本采集、存放及運(yùn)輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；

3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

使用方法：

基孔肯雅PCR檢測(cè)試劑盒注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1.樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等，具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。

2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）

取N個(gè)（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

PCR反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3’端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴(kuò)增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

基孔肯雅PCR檢測(cè)試劑盒

維生素K4

葡醛酸鈉

人組織蛋白去乙?；?HD)

NADPH-細(xì)胞色素C還原酶（NCR）測(cè)試盒

D-山梨糖

大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)

兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w(ANGA)

人白血病因子受體(LIFR)

海藻糖含量測(cè)試盒

人β2糖蛋白(β2-GP)

大鼠C型鈉尿肽(CNP)

2′-氨基脫氧尿苷

人疊氮胸苷(AZT)

DL-高半胱氨酸

雞蛋卵黃高磷蛋白磷酸肽(PPP)

人凝血因子Ⅸ(FⅨ)

人可溶性腺苷酸環(huán)化酶(sAC)

人細(xì)胞色素b561(cytb561)

人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)

?；o酶A合成酶

人腺IgM(ADV-IgM)

人維生素C(VC)

人巨噬細(xì)胞移動(dòng)因子(MIF)

單胺氧化酶(MAO)測(cè)試盒

大鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(STK) 

二胺氧化酶(DAO)測(cè)試盒

漆酶測(cè)試盒

大鼠脫氫表雄酮(DHEA)

人壞死因子α轉(zhuǎn)化酶(TACE)

L-半胱氨酸鹽酸鹽一水物

人抗單核細(xì)胞抗體(AMA)

酒石黃

人膽酸(CA) 

人多功能蛋白聚糖(VS)

大鼠β-防御素(β-DF)

可溶性果膠（WSP)含量測(cè)試盒

松三糖一水物

人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)

無水甜菜堿

L-丙氨酸

人丁型肝炎IgG(HDV IgG)

寶石紅蛋白染色試劑

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)

變色酸二鈉鹽

次甲基綠

人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR) 

人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri) 

人游離甲狀腺素(FT4)

雞白介素9(IL-9)

人層連蛋白/板層素(LN) 

大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)

大鼠環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)

大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)

甘油醛-3-磷酸脫氫酶

人牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)

甘氨酸鈣

1,6-二磷酸果糖一鈣鹽

BCA蛋白法含量測(cè)試盒

2′-氟脫氧胞苷

L-天門冬氨酸鈣

唾液乳糖

BOC-L-苯丙氨醇

二甲苯青FF

膽紅素氧化酶

DL-谷氨酸

硫氧還蛋白過氧化物酶（TPX）測(cè)試盒

大鼠三碘甲狀腺原氨酸(T3)

大鼠促生長(zhǎng)釋放(GRH)

大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)

釕紅

丙酮酸脫羧酶

人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb) 

肌苷-5'-單磷酸二鈉鹽水合物

L-組氨酸

人妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)測(cè)試盒

PUC18

大鼠白介素1(IL-1)

大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)

大鼠抗紅細(xì)胞抗體(RBC) 

L-酪氨酸二鈉鹽

兔子組織多肽抗原(TPA)

人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES/CCL5) 

人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)

組蛋白A（小牛胸腺）

人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab) 

L-甘-谷二肽

硫黃素T

多聚左旋賴氨酸

土壤水溶性總鹽測(cè)試盒

大鼠活化素A受體抗體(ACV-RAb)

人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)