1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（zui多凍融3次）；

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

使用方法：

非洲豬瘟PCR檢測試劑盒 注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1.樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。

2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）

取N個（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。

PCR反應五要素：

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設(shè)計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3’端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

非洲豬瘟PCR檢測試劑盒 

蕓香葉苷

大鼠補體片斷*(C*)

磷脂酶D

苯甲氧羰酰琥珀酰亞胺

人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6(LRP-6)

線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶測試盒

大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)

人遲現(xiàn)抗原4(VLA4) 

雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)

葡萄糖脫氫酶（GCDH)測試盒

人血管緊張肽酶A(ATA) 

豚鼠γ干擾素(IFN-γ)

蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原（vtg)

磷脂酰絲氨酸

FMOC-L-苯丙氨酸

ADP含量測試盒

D-脯氨酰胺

亞甲基藍

S-羧甲基-L-半胱氨酸

2′-脫氧肌苷-5′-單磷酸二鈉鹽

人C4結(jié)合蛋白(C4BP)

人鳥氨酸脫羧酶(ODC)

人毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR) 

大鼠促腎上皮質(zhì)釋放(CRH)

谷氨酸脫羧酶（GAD）測試盒

甲基紫

人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA) 

人吖啶橙(AO)

土壤全鐵測試盒

α-酮基異己酸鈣鹽

5-鳥苷一磷酸二鈉鹽

萎銹靈

馬免疫球蛋白E(IgE)

人游離血紅蛋白(f-Hb) 

固黑B鹽

維生素A棕櫚酸酯

T7 DNA聚合酶

多聚左旋賴氨酸溶液

人補體片段3b受體(C3bR) 

人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri) 

人游離甲狀腺素(FT4)

雞白介素9(IL-9)

人層連蛋白/板層素(LN) 

大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)

大鼠環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)

大鼠8異前列腺素(8-iso-PG)

甘油醛-3-磷酸脫氫酶

人牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)

甘氨酸鈣

1,6-二磷酸果糖一鈣鹽

羧肽酶B

二水還原茚三酮

植物銨態(tài)氮測試盒

雞性腸炎(DEV) 

兔血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF) 

酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒

D-賴氨酸鹽酸鹽

人游離前列腺特異性抗原(fPSA)

人β乳糖蛋白抗體IgG 

人S100B蛋白(S-100B)

兔抑瘤素M(OSM)

人補體片斷*(C*)

大鼠補體蛋白4(C4)

DL-肉堿鹽酸鹽

尿苷二磷酸葡糖醛酸

人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA) 

魚促黃體

大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)

土壤堿性蛋白酶(S-ALPT)測試盒