1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（zui多凍融3次）；

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

使用方法：

單增李斯特菌prfA基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1.樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。

2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）

取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區(qū)。

PCR反應五要素：

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3’端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

單增李斯特菌prfA基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)

蕓香葉苷

大鼠補體片斷*(C*)

磷脂酶D

苯甲氧羰酰琥珀酰亞胺

人低密度脂蛋白受體相關蛋白6(LRP-6)

線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶測試盒

大鼠內皮素1(ET-1)

人遲現(xiàn)抗原4(VLA4) 

雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)

葡萄糖脫氫酶（GCDH)測試盒

人血管緊張肽酶A(ATA) 

豚鼠γ干擾素(IFN-γ)

蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原（vtg)

磷脂酰絲氨酸

FMOC-L-苯丙氨酸

ADP含量測試盒

D-脯氨酰胺

亞甲基藍

S-羧甲基-L-半胱氨酸

2′-脫氧肌苷-5′-單磷酸二鈉鹽

人C4結合蛋白(C4BP)

人鳥氨酸脫羧酶(ODC)

人毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR) 

大鼠促腎上皮質釋放(CRH)

谷氨酸脫羧酶（GAD）測試盒

甲基紫

人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA) 

人吖啶橙(AO)

土壤全鐵測試盒

α-酮基異己酸鈣鹽

5-鳥苷一磷酸二鈉鹽

5-胞苷一磷酸二鈉鹽

雞煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH) 

豬血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)

干酪素鈉

土壤全磷含量測定

人蛋白酶3抗體(PR3Ab)

檸檬酸鈣四水物

人乙型肝炎X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)

雞傳染性鼻炎抗體(IC)

2′-疊氮脫氧尿苷

還原輔酶Ⅱ四鈉鹽水合物

兔子基質金屬蛋白酶因子1(TIMP-1)

兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)

3-磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒

核固紅

大鼠睫狀神經營養(yǎng)因子(CNTF)

Hotstart Taq酶

線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒   

土壤纖維素酶（S-CL）/羧甲基纖維素酶測試盒

人白介素17(IL-17)

甲基紅

人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)

N-芴甲氧羰基-N'-甲苯磺?；?L-精氨酸

維生素A

人抗突觸前膜抗體(PsmAb)