1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（zui多凍融3次）；

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

使用方法：

埃立克體PCR檢測試劑盒注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數秒后使用。

1.樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。

2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）

取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。

組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區(qū)。

PCR反應五要素：

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3’端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子*很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

埃立克體PCR檢測試劑盒

蕓香葉苷

大鼠補體片斷*(C*)

磷脂酶D

苯甲氧羰酰琥珀酰亞胺

人低密度脂蛋白受體相關蛋白6(LRP-6)

線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶測試盒

大鼠內皮素1(ET-1)

人遲現(xiàn)抗原4(VLA4) 

雞弓形蟲循環(huán)抗原(TCA)

葡萄糖脫氫酶（GCDH)測試盒

人血管緊張肽酶A(ATA) 

大鼠吡啶酚(PYD)

人胰激肽原酶(PK) 

幾丁質酶測試盒

魯米諾單鈉鹽

燦爛甲酚藍

大鼠血管舒緩激肽(BK)

D-(-)水楊苷

人壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)

雞白痢抗體檢測(PD) 

肉堿乙酰轉移酶

人沙眼衣原體(CT)

大鼠乙醛脫氫酶(ALDH)

對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷

鹿胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)