透明毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒價(jià)格
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上海一研生物科技有限公司

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商品參數(shù)
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商品介紹
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用途范圍 產(chǎn)品僅用于科研
純度 詳見說明書%
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 一研
規(guī)格 50T
貨號(hào) EY01P2615
是否進(jìn)口
商品介紹

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號(hào)

透明毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒價(jià)格

Trichostrongylus vitrinus

EY01P2615

 

RNA質(zhì)量檢測(cè):

透明毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒價(jià)格1)紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下:

RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

5ul用來測(cè)量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。

2)變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS,pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

服務(wù)流程:

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針(染料法只需設(shè)計(jì)引物)

2、抽提DNA、RNA,并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測(cè)數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品(引物、RNA和cDNA)

 

 

使用方法:

一、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)

10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)
注意事項(xiàng):

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。

3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。

5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

保存方式

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲(chǔ)存,有效期一年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。

 

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檸檬酸鐵銨 質(zhì)量規(guī)格:Bentone SD-2,適于中高極性溶劑 Bentonite

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檸檬酸三酯(>99.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:CP,200目,粉末狀,褐色 Activated charcoal

檸檬酸三鉀一水 質(zhì)量規(guī)格:AR,20-50目 Activated charcoal

檸檬酸三酯(>98.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:電鍍脫色專用,200目,from wood Activated charcoal

檸檬酸三酯(>98%,BR) 質(zhì)量規(guī)格:催化劑載體專用,8-16目 Activated charcoal

檸檬酸三酯(>97.0%(T)) 質(zhì)量規(guī)格:凈水、氣體純化專用,棒,φ1.0mm Activated charcoal

檸檬酸三銨 質(zhì)量規(guī)格:凈水、氣體純化專用,10-24目 Activated charcoal

檸檬酸鈉二水;檸檬酸三鈉二水 質(zhì)量規(guī)格:電鍍脫色專用,40-60目,from Nutshell Activated charcoal
透明毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒價(jià)格竹節(jié)香附素A對(duì)照品產(chǎn)品CAS:89412-79-3

規(guī)格含量:20mg

竹節(jié)香附素A對(duì)照品

英文名稱:Raddeanin(Anemodeanin)A

分子式:C47H76O16

分子量:897.101

CAS號(hào):89412-79-3


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