懸鉤子農桿菌PCR試劑盒
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上海滬崢專業(yè)生產銷售懸鉤子農桿菌PCR試劑盒現貨,
本試劑盒引物經過優(yōu)化,反應特異性強,即開即用,歡迎新老客戶咨詢訂購。,本試劑盒引物經過優(yōu)化,反應特異性強,即開即用,歡迎新老客戶咨詢訂購。
產品詳細信息
中文名稱:懸鉤子農桿菌PCR試劑盒
英文名稱:Agrobacterium rubi
產品規(guī)格:50T/盒
用途】用于懸鉤子農桿菌的檢測、診斷和流行病學調查。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5次,有效期12個月。
提示:本品僅用于科研實驗,不能用作醫(yī)療及臨床診斷。
懸鉤子農桿菌PCR試劑盒使用方法
操作步驟
1 病毒 RNA 的提取
1.1 取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照,分別加入裂解液 600 μL,充分顛倒混勻,室溫靜置 3~
5 min。
1.2 將液體吸入吸附柱中(吸附柱要套上收集管,吸取液體時盡量不要吸到懸浮雜質,以免離心時 堵塞吸附柱),13000 rpm 離心 30 s。
1.3 棄去收集管中液體,加入 600 μL 洗液,13000 rpm 離心 30 s。
1.4 重復步驟 1.3。
1.5 棄去收集管中液體,13000 rpm 空柱離心 2 min,以除去殘留的洗滌液。
1.6 將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中,向柱中央加入洗脫液 50 μL,室溫靜置 1 min,13000 rpm
離心 30 s,離心管中液體即為模板 RNA。
2 實時熒光 RT-PCR 操作
設被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為 N,則反應體系配制如下: 試劑 體系
在PCR 管中加入下列成分:
成份 |
樣品 |
陽性對照 |
陰性對照 |
雙酶一管式 RT-PCR Buffer, 2× | 15 uL | 15 uL | 15 uL |
EMCV 專一性引物對 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
樣品 RNA | 1-5 uL | 無 | 2 uL |
EMCV 陽性對照 | 無 | 2 uL | 無 |
補超純水到 | 28 uL | 28 uL | 無 |
MMLV-Taq Mix | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
[1] 輕柔混勻后上機,按下面參數進行 RT-PCR。
結果判定
1 結果分析條件設定 閾值設定原則:閾值線設定于剛好超過陰性對照擴增曲線的點。不同儀器可根據儀器噪音
情況進行調整。
2 結果描述及判定
陽性對照 Ct 值≤30 并出現特定的擴增曲線,陰性對照無 Ct 值并且無特定擴增曲線,實驗結果成 立;被檢樣品 Ct 值≤30 并出現特定的擴增曲線為 AIV 陽性;被檢樣品 30<Ct<37 并出現特定的擴 增曲線,需重新取樣提取 RNA,擴增后進行結果判定,如仍是可疑,可判定為陽性;被檢樣品 Ct 值≥37 時,超過本方法檢測靈敏度范圍,判定為陰性;對于某些未呈現 S 型曲線,但本底較高的樣 品,應為陰性。
懸鉤子農桿菌PCR試劑盒注意事項】
? 所有操作嚴格按照說明書進行;
? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;
? 反應液應避光保存;
? 反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
? 實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理