上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售萊氏無膽甾原體PCR試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價(jià)格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購。

產(chǎn)品詳細(xì)信息

中文名稱：萊氏無膽甾原體PCR試劑盒

英文名稱：Acholeplasma laidlawii

產(chǎn)品規(guī)格：50T/盒

用途】用于鮑肌肉萎縮癥病毒病毒病的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個(gè)月。

提示：本品僅用于科研實(shí)驗(yàn)，不能用作醫(yī)療及臨床診斷。

萊氏無膽甾原體PCR試劑盒使用方法

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；液體樣品，直接取100μL提取

1.2 DNA提取

1) DNA的提取也可以采用（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

3. PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

4. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline和Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道35<Ct值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為35<Ct值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

5. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38或無Ct值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

6. 檢測方法的局限性

? 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

? 陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

? 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

? 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

? 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

萊氏無膽甾原體PCR試劑盒【注意事項(xiàng)】

? 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，

公司名稱 上海滬崢生物科技有限公司

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