服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測：

海水派琴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑1）紫外吸收法測定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品：

2X PCR Mix（即用型PCR試劑盒3.0）Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

2X HotStart PCR Mix(即用型熱啟動PCR試劑盒)Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

免DNA提取PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型易錯PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

DNA Shuffing試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型長片段PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型高保真PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型高保真PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型多重 PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型熒光定量PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

即用型熒光定量PCR試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

Real-Time PCR稀釋液Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

ROX參考染料Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

ROX參考染料IICell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

cDNA第一鏈合成試劑盒Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor100mL

異補骨脂查爾酮;補骨脂素 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 Voriconazole

異托溴銨（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)  Vorinostat/SAHA

異嗪亞砜 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Vorinostat/SAHA

異隆（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Argireline Acetate

異凈(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：>98,BR Levothyroxine

異基伊曲康唑 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Adenine

異基三基碘化膦(>98.0%(HPLC)(T)) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Adenine

異基-β-D-代半乳糖苷(IPTG) 質(zhì)量規(guī)格：potency>765 μg of erythromycin (C37H67NO13) per mg,USP35 Erythromycin ethylsuccinate

異基4-羥基-2H-1,2-并噻嗪-3-羧酸鹽 1,1-二氧化物 (吡羅昔康雜質(zhì)I) 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BP/USP Ibuprofen

異基 4-羥基-2-基-2H-1,2-并噻嗪-3-羧酸鹽 1,1-二氧化物 (吡羅昔康雜質(zhì) L) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Ibuprofen
海水派琴蟲探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑關(guān)附甲素對照品產(chǎn)品CAS：1394-48-5

規(guī)格含量：10mg

關(guān)附甲素對照品

英文名稱：Guan-fubaseA

分子式：C24H31NO6

分子量：429.51

CAS號：1394-48-5
注意事項：

1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結(jié)果。

4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

保存方式

冰袋運輸。-20℃避光儲存，有效期一年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。