樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測(cè)：

卵形瘧原蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒價(jià)格1）紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋?zhuān)?:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來(lái)測(cè)量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶(hù)提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測(cè)數(shù)據(jù)、溶解曲線(xiàn)、擴(kuò)增曲線(xiàn))

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

使用方法：

一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）
注意事項(xiàng)：

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(zhǎng)期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測(cè)時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以?xún)?nèi)，以便擴(kuò)增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

保存方式

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲(chǔ)存，有效期一年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。

以下是公司正在促銷(xiāo)打折產(chǎn)品：

EcoR I-Not I-BamH I接頭CHX（Cycloheximide From Microbial)100mL

Oligo快速?gòu)?fù)性液，10×Chymostatin Solution100mL

裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒（無(wú)高效轉(zhuǎn)化液）Chymotrypsin100mL

裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒（含高效轉(zhuǎn)化液）Chymotrypsin100mL

酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒（無(wú)高效轉(zhuǎn)化液）Chymotrypsinogen100mL

酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒（含高效轉(zhuǎn)化液）Cibacron Blue Agarose100mL

酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒Cibacron Blue Agarose100mL

高效E.coli感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒Circular DNA WGA Kit100mL

高效農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒Citrate Buffer,0.5M,pH2.5  100mL

DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞Citrate Buffer,0.5M,pH3.0  100mL

HB101化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞Citrate Buffer,0.5M,pH3.5  100mL

JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞Citrate Buffer,0.5M,pH4.0  100mL

SURE化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞Citrate Buffer,0.5M,pH4.5  100mL

TG1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞Citrate Buffer,0.5M,pH5.0  100mL

Top10化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞Citrate Buffer,0.5M,pH5.5  100mL

胰蛋白酶1:250 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定 Cefpirome Sulfate

胰蛋白胨(BD) 質(zhì)量規(guī)格：含量≥900μg/mg，純度大于99%，USP32 Amisulpride

胰蛋白胨 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Amisulpride

銥標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基質(zhì)：2.0mol/L鹽酸) 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Fenofibric acid

依澤替米貝酮 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Fenofibric acid

依澤替米貝羥基β-D-葡萄糖苷酸  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR Moxifloxacin Hydrochloride

依澤替米貝β-D-葡萄糖苷酸 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Moxifloxacin Hydrochloride

依澤替米貝;依折麥布(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR Salmeterol xinafoate

依澤替米貝;依折麥布 質(zhì)量規(guī)格：>99%以上，S-構(gòu)型無(wú)結(jié)晶水 Naproxen

依西美坦（企標(biāo)） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Naproxen
卵形瘧原蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒價(jià)格香豆素對(duì)照品產(chǎn)品CAS：91-64-5

規(guī)格含量：20mg

香豆素對(duì)照品

英文名稱(chēng)：Coumarin

別名:鄰氧萘酮;香豆內(nèi)脂

分子式:C9H6O2

分子量:146.14

CAS號(hào):91-64-5