產(chǎn)品及特點(diǎn):

豎琴奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測(cè)豎琴奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù)豎琴奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測(cè)出樣品中的豎琴奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒成分，但不能檢測(cè)其他非豎琴奧斯特線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒成分。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個(gè)檢測(cè)過程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

PCR在分子和DNA分析中有多種用途，下面就向大家介紹PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

PCR實(shí)驗(yàn)步驟

典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是：

將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；

人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；

耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

通用原則：

1， 先選擇好探針，然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。

2， 擴(kuò)增子的長(zhǎng)度應(yīng)不超過400bp，理想的*能在100－150bp內(nèi)，擴(kuò)增片斷約短，有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性

3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng)，從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低，及在SG分析中非特異信號(hào)。

4， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個(gè)連續(xù)的G）

5， 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測(cè)，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。

b），探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)

1，在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針

2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間，如果是目測(cè)探針，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。

3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會(huì)有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在

4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率，這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。

6， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個(gè)bp。

7， 檢測(cè)探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。

熒光化學(xué)物質(zhì)：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡(jiǎn)述如下：

1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的*技術(shù)平臺(tái)。

2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。

3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

柱式動(dòng)物RNA-DNA雙提試劑盒145-2C110.1mL

血液RNAout 15P-10.1mL

血液RNAout 1A75 Bacillus subtilis Strain0.1mL×10

柱式血液RNAout1-Heptanesulfonic Acid Sodium Salt0.1mL×10

大提柱式血液RNAout1-Naphthyl Acetate0.1mL×10

液體樣品RNAout1-Naphthylamine0.1mL×10

液體樣品RNAout1st-Strand cDNA Synthesis Kit0.1mL×10

柱式血清血漿RNAout1st-Strand cDNA Synthesis Kit0.1mL×10

軟骨RNAout2，3，5-Triphenyl-2H-Tetrazolium Chloride(TTC)0.1mL×10

柱式軟骨RNAout2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid)0.1mL×10

石蠟包埋組織RNAout2,5-Diphenyloxazole（PPO）0.1mL×10

免RNA提取FFPE RT-PCR試劑盒2,6-Dichloroindophenol Sodium Salt Hydrate0.1mL×10

柱式昆蟲RNAout2×YT Medium Powder0.1mL×10

柱式軟體RNAout22RV10.1mL×10

柱式糞便RNAout293 001A0.1mL×10

左氧氟沙星-d8 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Alendronate Sodium

左氧氟沙星（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：>99%,超純 Allopurinol

左氧氟沙星 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Allopurinol

左氧氟沙星 質(zhì)量規(guī)格：含量≥98.0% Allylestrenol

馬兜鈴酸A 中文別名：   木通甲素；馬兜鈴酸I 英文名：   Aristolochic Acid A 英文別名：   3,4-methylenedioxy-8-methoxy-10-nitro-1-phenanthrenecarboxylicacid CAS登錄號(hào)：   313-67-7 分子式：   C17H11NO7 分子量：   341.27 分子結(jié)構(gòu)：      外觀：   棕色結(jié)晶 規(guī)格：   20mg/支 純度：   HPLC≥98% 用途：   用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。 提取來源：   多年生的纏繞性草本植物馬兜鈴（Aristolochia debilis） 溶解性：   溶于乙醇、氯仿、*、丙酮、醋酸、苯胺及堿，微溶于堿，幾乎不溶于苯及二硫化碳。 熔點(diǎn)：   281-286℃ ：   可用于、、、、、等感染性疾病以及癤病、等，多與抗生素等配合使用以加速痊瘉。此外尚可用于因或引起的白細(xì)胞數(shù)下降。 貯存條件：   4℃冷藏、密封、避光 有效期：   2年

鬧羊花毒素V 英文名：   Rhodojaponin V 英文別名：   (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 14-acetate CAS登錄號(hào)：   37720-86-8 分子式：   C26H40O9 分子量：   496.59 分子結(jié)構(gòu)：      外觀：   白色晶體 規(guī)格：   5mg/支 純度：   HPLC≥98% 用途：   用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。 提取來源：   杜鵑花科杜鵑花屬植物鬧羊花( Rhododendron molle G. Don) 溶解性：   可以石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶劑，不溶于水。 ：   具有一定的抗菌、活性。 貯存條件：   4℃冷藏、密封、避光 有效期：   2年

鬧羊花毒素III 英文名：   Rhodojaponin-III 英文別名：   (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pento