玫瑰花PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)
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玫瑰花PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)
玫瑰花PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)
玫瑰花PCR試劑盒 PCR定量檢測(cè)

玫瑰花PCR試劑盒-PCR定量檢測(cè)

價(jià)格

訂貨量(盒)

¥1490.00

≥1

¥1290.00

≥5

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上海康朗生物科技有限公司

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商品參數(shù)
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商品介紹
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聯(lián)系方式
主要組成成分 PCR MagicMix 3.0, 超純水, PCR 引物混合液,PCR 陽(yáng)性對(duì)照,核酸釋放劑,說(shuō)明書(shū)
貨號(hào) KL13-99177
性狀 水劑
規(guī)格 50T
貯藏 -20℃保存
有效期 一年
貨期 現(xiàn)貨
價(jià)格 1490
產(chǎn)品及特點(diǎn) 具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)。
品牌 康朗生物/KALANG
商品介紹

玫瑰花PCR試劑盒PCR定量檢測(cè)

 

特別提示:包括玫瑰花PCR試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

 

產(chǎn)品名稱(chēng):玫瑰花PCR試劑盒

英文名稱(chēng):Flos rosae rugosae

產(chǎn)品規(guī)格:50

產(chǎn)品保存:-20℃保存

產(chǎn)品有效期:一年

儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。

產(chǎn)品名稱(chēng)

方法

規(guī)格

價(jià)格

玫瑰花LAMP試劑盒

LAMP

50

2490

玫瑰花PCR試劑盒

PCR

50

1490

玫瑰花染料法熒光定量PCR試劑盒

染料法

50

2490

玫瑰花探針?lè)晒舛?font face="Calibri">PCR試劑盒

探針?lè)?/span>

50

3490

 

 

玫瑰花PCR試劑盒產(chǎn)品及特點(diǎn): 

因此快速靈敏檢測(cè)玫瑰花具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專(zhuān)一性強(qiáng),只擴(kuò)增玫瑰花,與其他植物沒(méi)有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

玫瑰花PCR試劑盒規(guī)格及成分:

成分

編號(hào)

十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0

1

1 mL(紅蓋)

超純水

2

1 mL(亮黃色)

玫瑰花 PCR 引物混合液

3

100 μL(白蓋)

玫瑰花 PCR 陽(yáng)性對(duì)照

1×10E8 拷貝/μL

4

50 μL(黃蓋)

核酸釋放劑(試用裝)

5

20 次(1 mL,綠蓋)

使用手冊(cè)

6

1

運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。

自備試劑樣品 DNA。

玫瑰花PCR試劑盒使用方法

 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送20 次核酸釋放劑試用裝,其使用手冊(cè)可以從本公司網(wǎng)站訂購(gòu)核酸釋放劑。

2. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要做 N+2 個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 玫瑰花 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品,在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照,故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分:

成分

N+2 個(gè)樣品管

PCR 陰性對(duì)照

PCR 陽(yáng)性對(duì)照

PCR MagicMix 3.0

20 μL

20 μL

20 μL

玫瑰花PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板

18 μL

--

--

PCR 陰性對(duì)照(水)

--

18 μL

--

PCR 陽(yáng)性對(duì)照(玫瑰花

PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000

倍稀釋液)

--

--

18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng):

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95

5 min

PCR 反應(yīng)(35 個(gè)循環(huán))

95

15 sec

57

15 sec

72

40 sec

最后延伸

72

10 min

三、電泳檢測(cè)

5. 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng)性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn),陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

PCR常見(jiàn)問(wèn)題的常見(jiàn)原因

1. cDNA產(chǎn)量的很低可能的原因:

1) RNA模板質(zhì)量低

2) 對(duì)mRNA濃度估計(jì)過(guò)高

3) 反應(yīng)體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足

4) 同位素磷32過(guò)期

5) 反應(yīng)體積過(guò)大,不應(yīng)超過(guò)50μl

2. 擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒(méi)有條帶或條帶很淺

1) 最常見(jiàn)的原因在于您的反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系

3) 與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)

4) 建議在試驗(yàn)中加入對(duì)照RNA

5) 第一鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過(guò)1/10

6) 建議用Oligo(dT)或隨機(jī)引物代替基因特異性引物(GSP)用于第一鏈合成。由于RNA模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu),如環(huán)狀結(jié)果,有可能導(dǎo)致GSP無(wú)法與模板退火;或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無(wú)法從此引物進(jìn)行有效延伸。

7) 目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn),可以試用以下方法解決:

a. 將第一鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。

b. 使用隨機(jī)六聚體代替Oligo(dT)進(jìn)行第一鏈反應(yīng)。

 

3. 產(chǎn)生非特異性條帶

1) RT陰性對(duì)照檢測(cè)是否被基因組DNA污染。如果RT陰性對(duì)照的PCR結(jié)果也顯示同樣條帶,則需要用DNase I重新處理樣品。

2) PCR反應(yīng)中,非特異的起始擴(kuò)增將導(dǎo)致產(chǎn)生非特異性結(jié)果。在低于引物Tm 25℃的溫度下進(jìn)行退火,降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結(jié)果的產(chǎn)生。

3) 由于mRNA剪切方式的不同,根據(jù)選擇引物的不同將導(dǎo)致產(chǎn)生不同的RT-PCR結(jié)果。

4. 產(chǎn)生彌散(smear)條帶

1) PCR反應(yīng)體系中第一鏈產(chǎn)物的含量過(guò)高

2) 減少引物的用量

3) 優(yōu)化PCR反應(yīng)條件/減少PCR的循環(huán)次數(shù)

4) 在用DNase處理被DNA污染的RNA樣品時(shí),其產(chǎn)生的寡核苷酸片段會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增,一般會(huì)顯示為彌散背景。

5. 產(chǎn)生大分子量的彌散條帶

1) 大多數(shù)情況下是由于退火溫度過(guò)低而導(dǎo)致的非特異性的起始及延伸產(chǎn)生的

2) 對(duì)于長(zhǎng)片段的PCR,建議將反應(yīng)體系中cDNA的濃度稀釋至1:10(或1:100-1:200

6. 在無(wú)反轉(zhuǎn)錄酶的情況下,對(duì)照RNA獲得擴(kuò)增結(jié)果

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