樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測(cè)：

人免疫缺陷病毒型組前病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒價(jià)格1）紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋?zhuān)?:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來(lái)測(cè)量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶(hù)提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測(cè)數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

使用方法：

一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）
注意事項(xiàng)：

1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(zhǎng)期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。

3. 電泳檢測(cè)時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以?xún)?nèi)，以便擴(kuò)增效率佳。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

保存方式

冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲(chǔ)存，有效期一年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。

以下是公司正在促銷(xiāo)打折產(chǎn)品：

艾利希體屬（埃立克體屬）通用英文名稱(chēng)  Anti-ANGPTL5 中文名稱(chēng)  血管生成素相關(guān)蛋白5 別    名  Angiopoietin like 5; Angiopoietin related protein 5; Angiopoietin-like protein 5; Angiopoietin-related protein 5; ANGL5_HUMAN; ANGPTL 5; ANGPTL5; Fibrinogen like; hide 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg  產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

嚙蝕艾肯菌英文名稱(chēng)  Anti-ANGPTL6 中文名稱(chēng)  血管生成素相關(guān)蛋白6抗體 別    名  AGF; Angiopoietin like 6; Angiopoietin like Protein 6; Angiopoietin related Growth Factor; Angiopoietin related protein 5; Angiopoietin-like protein 6; Angiopoietin-related growth factor; Angiopoietin-related protein 5; Angiopoietin-related protein 6; ANGL6_HUMAN; Angptl6; ARP5. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg   產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

艾美耳球蟲(chóng)屬通用英文名稱(chēng)  Anti-AMH/MIS 中文名稱(chēng)  Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 別    名  MIS_HUMAN; Anti muellerian hormone; MIF; MIS; Muellerian inhibiting factor; Mullerian inhibiting substance. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500

施氏油脂線蟲(chóng)英文名稱(chēng)  Anti-EphA8/Eph receptor A8 中文名稱(chēng)  酪氨酸蛋白激酶受體A8抗體 別    名  EEK; EK3; EPH and ELK related kinase; EPH like kinase 3; EphA8; Ephrin Type A Receptor 8 Precursor; HEK3; KIAA1459; Tyrosylprotein Kinase; 2.7.1.112; EPHA8_HUMAN. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  IF=1:100-500
人免疫缺陷病毒型組前病毒探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒價(jià)格磺胺對(duì)照品產(chǎn)品CAS：63-74-1

規(guī)格含量：1000mg/支

磺胺對(duì)照品

分子式：C6H8N2O2S

分子量：172.21

CAS 號(hào)：63-74-1

用途：本品為磺胺(Sulfanilamide)，僅供熔點(diǎn)溫度計(jì)校準(zhǔn)用，按照中國(guó)藥典附錄熔點(diǎn)測(cè)定法第一法測(cè)定，升溫速度以每分鐘上升 1.5℃為宜，熔點(diǎn)為 166℃ 。

包裝及裝量：棕色小瓶裝，每支約 1 克。

保存條件：遮光，密封保存。