服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測：

以色列急性癱瘓病毒探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑1）紫外吸收法測定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品：

豬嗜血桿菌英文名稱  Anti-ATP1A1 中文名稱  Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1抗體 別    名  alpha 3 Sodium Potassium ATPase ; AT1A1_HUMAN; ATP1A1; Atpa-1; ATPase Na+/K+ transporting alpha 1 polypeptide; BC010319; EC 3.6.3.9; MGC3285; MGC38419; MGC51750; Na K ATPase alpha A catalytic polypeptide; Na K ATPase catalytic subunit alpha A protein; Na(+)/K(+) ATPase 1; Na(+)/K(+) ATPase alpha-1 subunit; Na+/K+ ATPase alpha 1 subunit; Na+/K+ ATPase 1; Nkaa1b; Sodium potassium ATPase alpha 1 polypeptide; Sodium pump 1; Sodium pump subunit alpha-1; Sodium/potassium transporting ATPase alpha 1 chain; Sodium/potassium-transporting ATPase subunit alpha-1. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  Flow-Cyt=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

沿岸單孢子蟲英文名稱  Anti-phospho-Na+/K+-ATPase Alpha1(Ser 943) 中文名稱  磷酸化鈉鉀ATP酶α1多肽抗體 別    名  p-Na+/K+-ATPase Alpha1(Ser943); p-Na+/K+-ATPase alpha1; AT1A1_HUMAN; ATP1A1; Atpa-1; ATPase Na+/K+ transporting alpha 1 polypeptide; BC010319; EC 3.6.3.9; MGC3285; MGC38419; MGC51750; Na K ATPase alpha A catalytic polypeptide; Na K ATPase catalytic subunit alpha A protein; Na(+)/K(+) ATPase 1; Na(+)/K(+) ATPase alpha-1 subunit; Na+/K+ ATPase alpha 1 subunit; Na+/K+ ATPase 1; Nkaa1b; Sodium potassium ATPase alpha 1 polypeptide; Sodium pump 1; Sodium pump subunit alpha-1; Sodium/potassium transporting ATPase alpha 1 chain; Sodium/potassium-transporting ATPase subunit alpha-1. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/100μg   產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

尼氏單孢子蟲英文名稱  Anti-ACL6B/BAF53b 中文名稱  肌動蛋白樣蛋白6B抗體 別    名  53 kDa BRG1 associated factor B; ACL 6B; ACL6B; Actin like 6; Actin like protein 6B; Actin like protein6B; Actin related protein; Actin related protein Baf53b; actin-like 6B; Actl 6; ACTL 6B; Actl6; ACTL6 B; ACTL6B; Arp Na; ArpN a; ArpN alpha; ArpNa; ArpNalpha; Baf 53b; ACL6B_HUMAN. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg   產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

單孢子蟲通用英文名稱  Anti-ATRIP/TREX1 中文名稱  系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體 別    名  AGS 1; AGS1; AGS-1; Aicardi Goutieres syndrome 1; ATIP; ATM and Rad3 related interacting protein; ATM and Rad3-related-interacting protein; ATR interacting protein; ATR-interacting protein; Atrip; ATRIP_HUMAN; Deoxyribonuclease III dnaQ/mutD (E. coli) like; DKFZp434J0310; DKFZp762J2115; DNase III; DRN 3; DRN3; FLJ12343; MGC20625; MGC26740; Three prime repair exonuclease 1; TREX 1; TREX1; TREX1 protein; MGC21482; 3' repair exonuclease 1; 3'-5' exonuclease TREX1. 濃    度  1mg/1ml 規(guī) 格  0.2ml/200μg   產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500
以色列急性癱瘓病毒探針法熒光定量PCR試劑盒進(jìn)口試劑甲萘醌對照品產(chǎn)品CAS：28-27-5

規(guī)格含量：100mg/支

甲萘醌對照品

英文名稱：Menadione

類別：化學(xué)對照品

分子式：C11H8O2

分子量：172.18

CAS 號：58-27-5

用途：供含量測定用。

特性量值：按 C11H8O2計，供 HPLC 法測定，含量為 99.7％；供 UV法測定，含量為 99.8％。

使用方法：使用前不需干燥處理。

包裝：棕色西林瓶

規(guī)格：10