服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測(cè)數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

樣品RNA的抽提

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

RNA質(zhì)量檢測(cè)：

產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌A型探針法熒光定量PCR試劑盒檢測(cè)1）紫外吸收法測(cè)定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

濃度測(cè)定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495的TE中，測(cè)得A260 = 0.21

RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用來測(cè)量以后，剩余樣品RNA為35 l，剩余RNA總量為：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②純度檢測(cè)

RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

2）變性瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定

①制膠

1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS電泳緩沖液

濃度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸鈉

0.01M EDTA

灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）

以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品：

大鼠支鏈α-酮酸脫氫酶(BCKDK)ELISA試劑盒 ，英文名： BCKDK ELISA Kit

Sophora japonica agglinin (SJA) ELISA Kit 槐凝集素(SJA)ELISA試劑盒

Mouseierleukin10,IL-10ELISAKIT 小鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumangolgiprotein73,GP-73ELISAKit人高爾基蛋白73規(guī)格：48T/96T

無激素精制胎牛血清100毫升

ELISAKitTAb大鼠甲狀腺素抗體規(guī)格：48T/96T

人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

山羊G/H合酶2(PTGS2)免疫試劑盒 Goat Prostaglandin G/H syhase 2,PTGS2 ELISA kit

黏著斑激酶(FAK)ELISA試劑盒 ，英文名： FAK ELISA Kit

RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISA試劑盒兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanB-LymphocyteChemoatacta1,BLC-1ELISA試劑盒人B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanCyclicguanosinemonophosphate，cGMPELISAKit人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

P 物質(zhì) (Substance P)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

雷丸PCR鑒定試劑盒Phosphate Buffered Saline9ml*20支/包

改良EC（mEC+n）肉湯Semen litchi荔枝核PCR鑒定試劑盒  Modified EC Enrichment Broth10ml*20支/包"

"三糖鐵管Fructus forsythiae連翅PCR鑒定試劑盒   TSI5ml*20支/包

LST發(fā)酵管（含小倒管）Semen nelumbinis蓮子PCR鑒定試劑盒   LST10ml*20支/包

LST-MUGPlumula nelumbinis  蓮子心PCR鑒定試劑盒     LST-MUG10ml*20支/包

EC肉湯（含小倒管）Flos campsis凌霄花PCR鑒定試劑盒  EC Broth10ml*20支/包

煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB（含小倒管）Ganoderma靈芝PCR鑒定試劑盒Brilliant Green Lactose Bile Broth10ml*20支/包"

RV肉湯Fructus momordicae羅漢果PCR鑒定試劑盒  RV Broth10ml*20支/包

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）Caulis trachelospermi絡(luò)石藤PCR鑒定試劑盒  Selenite Cystine Broth10ml*20支/包

GN增菌液Lasiosphaera seu calvatia馬勃PCR鑒定試劑盒    GN Enrichment Broth9ml*20支/包

SBG增菌液Herba 

分泌型白細(xì)胞蛋白酶抑制物 (SLPI)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

生存素 (survivin)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

性激素結(jié)合球蛋白 (SHBG)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

線粒體促凋亡蛋白 (SMAC)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白 A(SP-A)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子 (TARC)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

胸腺表達(dá)化學(xué)因子 (TECK)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

組織因子 (TF)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

組織因子抑制物 (TFPI)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子 - a (TGF -a )  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子 -β1(TGF- b 1)  ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌A型探針法熒光定量PCR試劑盒檢測(cè)五氟利多對(duì)照品產(chǎn)品CAS：26864-56-2

規(guī)格含量：100mg/支

五氟利多對(duì)照品

結(jié)構(gòu)式：

五氟利多對(duì)照品

分子式: C28H27ClF5NO

分子量: 523.97

CAS 號(hào)： 26864-56-2

用途： 本品供中國(guó)藥典（二部）五氟利多片中高效液相色譜法鑒別和含量測(cè)定用。本品含五氟利多以 C28H27ClF5NO 計(jì)，為 100.0%

包裝及裝量： 棕色瓶，約 100mg/支

保存條件： 遮光，密閉保存。

公司名稱 上海一研生物科技有限公司

聯(lián)系賣家 汪小姐 （QQ：3004994300）

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