上海一研生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學(xué)試劑盒
查菲艾利希體-查菲埃立克體探針法熒光定量PCR試劑盒檢測
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主營產(chǎn)品
服務(wù)流程:
1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針(染料法只需設(shè)計(jì)引物)
2、抽提DNA、RNA,并對(duì)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄
3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR
4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)
5、返還樣品(引物、RNA和cDNA)
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
查菲艾利希體(查菲埃立克體)探針法熒光定量PCR試劑盒檢測 | Ehrlichia chaffeensis | EY01P1946 |
樣品RNA的抽提
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
RNA質(zhì)量檢測:
查菲艾利希體(查菲埃立克體)探針法熒光定量PCR試劑盒檢測1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計(jì)算如下:
RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠板,預(yù)留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內(nèi),加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加)
以下是公司正在促銷打折產(chǎn)品:
大鼠相關(guān)弱凋亡誘導(dǎo)因子(TWEAK)ELISA試劑盒 ,英文名: TWEAK ELISA Kit
人抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA檢測試劑盒Humanai-cardiolipinaibodyIgA,ACA-IgAELISAKit 96T/48T
大鼠超氧化物歧化酶[錳],線粒體(SOD2)免疫試劑盒 Rat Superoxide dismase [Mn],mitochondrial(SOD2)ELISA kit
CLIAKitfoNFsR-II(HumaumornecrosisfactorsolublereceptorII)ELISAKIT人可溶性受體Ⅱ規(guī)格:48T/96T
全組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒10次
ELISAKitAAA人抗腎上腺皮質(zhì)抗體規(guī)格:48T/96T
牛腺病毒(ADV)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人組織蛋白酶H(CTSH)免疫試劑盒 Human cathepsin H,CTSH ELISA kit
免疫反應(yīng)性生長激素(irGH)ELISA試劑盒 ,英文名: irGH ELISA Kit
Ratai-endothelialcellaibody,AECAELISA試劑盒大鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humancholecystokininoctapeptide,CCK-8ELISA試劑盒人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanEndomeiumAibody,EMAbELISAKit人抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠粒細(xì)胞 - 巨噬細(xì)胞集落刺激因子 (rat GM-CSF) ELISA96T奧地利 Bender
大鼠生長激素 (rat GH) ELISA96T美國 DSL
大鼠致癌基因相關(guān)因子 / 細(xì)胞介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化因子 -2α ELISA96T德國 IBL
大鼠細(xì)胞介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化因子 -2 α (Rat GRO/CINC -2a ) ELISA96T德國 IBL
大鼠細(xì)胞間粘附分子 -1 (rat ICAM-1) ELISA96T美國 R&D
大鼠干擾素 -r (rat IFN-r) ELISA96T法國 Diaclone
大鼠樣生長因子 -1 (rat IGF-1) ELISA96T美國 DSL
小鼠 IgG(mouse IgG) ELISA96T美國 ADI
小鼠 IgM(mouse IgM) ELISA96T美國 ADI
大鼠白介素 -1 a (rat IL-1 a ) ELISA96T美國 Biosource
大鼠白介素 -1 b (rat IL-1 b ) ELISA96T美國 Biosource
大鼠白介素 -1RA(ratIL-1ra) ELISA96T美國 Biosource
查菲艾利希體(查菲埃立克體)探針法熒光定量PCR試劑盒檢測醋酸氯己定對(duì)照品產(chǎn)品CAS:56-95-1
規(guī)格含量:100mg/支
本品為醋酸氯己定(ChlorhexidineAcetate)。供含量測定用。使用前不需干燥處理, 按C22H30Cl2N10 · 2C2H4O2 計(jì),供HPLC法測定,含量為96.2%;供UV法測定,含量為96.9%.
分子式:C22H30Cl2N10 · 2C2H4O2
分子量:625.56
CAS號(hào):56-95-1
包裝及裝量: 棕色小瓶裝,每支約100毫克。
保存條件: 遮光,密封保存。
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
保存方式
冰袋運(yùn)輸。-20℃避光儲(chǔ)存,有效期一年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。