實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(汽油) 10*1mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒D亞群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒，停

燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(汽油) 5*5mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒E亞群RT-PCR試劑盒

燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(汽油) 10*1mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒E亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

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燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(汽油) 10*1mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒F亞群RT-PCR試劑盒

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燃油燃料中硫含量分析用系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(噴氣燃料) 5*5mL/盒 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒G亞群RT-PCR試劑盒

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Fe、Al、Cr三元素混合油液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 60mL/瓶 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒H亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

閉口閃點標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 250mL/瓶 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒H亞群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

閉口閃點標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 250mL/瓶 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒I亞群RT-PCR試劑盒

閉口閃點標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 250mL/瓶 Avian Leukosis Virus(ALV)禽病毒I亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
豬苓LAMP鑒定試劑盒廠家N,N,N,N-四甲基乙二胺/四甲替乙二胺/四甲基乙撐二胺/N,N,N’,N’-四甲基-1,2-乙二胺/1,2-雙(二甲氨基)/1,2-雙(二甲基氨基)乙烷/四甲基-1,2-亞乙基二胺/TEMED/TMEDABR，98%100毫升國產(chǎn)110-18-9RT，避光

500毫升國產(chǎn)

中文名稱： N,N,N,N-四甲基乙二胺

其他名稱： 四甲替乙二胺；四甲基乙撐二胺；N,N,N’,N’-四甲基-1,2-乙二胺；1,2-雙(二甲氨基)；1,2-雙(二甲基氨基)乙烷；四甲基-1,2-亞乙基二胺

英文名稱： TEMED

其他名稱： TMEDA；N,N,N′,N′-Tetramethylethylenediamine；1,2-Di(dimethylamino)ethane

產(chǎn)品規(guī)格： BR，98%

包裝：100毫升/500毫升

CAS號：110-18-9

C6H16N2=116.2

級別：Biothnology grade

含量：≥98.0%

密度(d204)：1.4175～1.4195

折光率(n20D)：0.7750～0.7790

性狀：無色液體。微有氨氣味。溶于水 和多數(shù)有機溶劑。凝固點 -55.1℃。沸點 121～122℃。閃點 18℃。易燃。低毒，半數(shù)致死量(大鼠，經(jīng)口)1580mg/kg

用途：生化研究。有機合成。 交聯(lián)聚合催化劑

保存：RT，避光