實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

丙酮中乙基谷硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amycolaptosis spp.擬無枝菌酸菌通用PCR試劑盒

丙酮中乙基溴硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amycolaptosis spp.擬無枝菌酸菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中溴硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amycolaptosis spp.擬無枝菌酸菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中皮蠅磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amycolata autotrophica自養(yǎng)無枝酸菌PCR試劑盒

丙酮中苯硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amycolata autotrophica自養(yǎng)無枝酸菌染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中*溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Amycolata autotrophica自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR試劑盒

土壤QC樣-多環(huán)芳烴（PAH） 30克 Anaplasma centrale 中央無漿體(無形體)PCR試劑盒

總余氯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 20mL Anaplasma centrale 中央無漿體(無形體)染料法熒光定量PCR試劑盒

總余氯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 20mL Anaplasma centrale 中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒

人血清無機(jī)成分電解質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1.6mL*3 Anaplasma marginale邊緣無漿體(無形體)PCR試劑盒

丙酮中六氯苯溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Anaplasma marginale邊緣無漿體(無形體)染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中硫丹溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Anaplasma marginale邊緣無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中丙線磷（滅線磷、滅克磷）溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)PCR試劑盒

丙酮中特丁硫磷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 1mL Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)染料法熒光定量PCR試劑盒

固體水分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 5g Anaplasma phagocytophilum嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒
馬齒莧LAMP鑒定試劑盒圖片轉(zhuǎn)移核糖核酸（酵母）/t-RNABR，15～20A260單位/mg100毫克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，9014-25-92～8℃

中文名稱： 轉(zhuǎn)移核糖核酸（酵母）

其他名稱： 9014-25-9

英文名稱： t-RNA

其他名稱： t-Ribonucleic acid(yeast)；Transfer RNA；Ribonucleic acid transfer from baker's yeast

產(chǎn)品規(guī)格： BR，15～20A260單位/mg

包 裝： 100毫克

CAS號(hào)：9014-25-9

級(jí)別：BR

含量：15～20A260單位/mg

電泳試驗(yàn)：合格

性狀：灰色至灰褐色粉末

用途：生化研究。蛋白質(zhì)生物合成中特異地轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸，并保證遺傳信息從核酸到蛋白質(zhì)準(zhǔn)確傳遞的一類小分子核糖核酸。每種氨基酸有一種以上相應(yīng)的tRNA，每個(gè)細(xì)胞約有40～70種不同的tRNA，分別由72～93個(gè)核苷酸組成，其中5％～20％為稀有堿基，相對(duì)分子量平均：為25 000，沉降系數(shù)4S。不同tRNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)不同，但有共同的三葉草二級(jí)結(jié)構(gòu)特征。其中氨基酸臂上3′端-C-C-A-OH是結(jié)合氨基酸的位點(diǎn)，氨基酸的?；谔禺惖陌被RNA合成酶催化下附著于相應(yīng)tRNA3′端腺苷的3′羥基上；反密碼環(huán)中三個(gè)連續(xù)的核苷酸構(gòu)成反密碼子與核糖體上mRNA的密碼子互補(bǔ)結(jié)合，使氨基酸準(zhǔn)確對(duì)號(hào)入座合成多肽鏈。通過這種密碼-反密碼-氨基酸之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，保證了核酸到蛋白質(zhì)的信息準(zhǔn)確傳遞。tRNA起了重要的接合(adaptor)作用

保存：2～8℃

核糖核酸鈉鹽（酵母）/核酸鈉鹽/RNA鈉/RNA-NaBR，90%5克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，CAS：9010-05-32～8℃

25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

100克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

中文名稱： 核糖核酸鈉鹽（酵母） 1公斤，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

其他中文名稱： 核酸鈉鹽；RNA鈉

英文名稱： RNA-Na

其他英文名稱： Ribonucleic acid sodium salt(yeast) ；Sodium nucleinate

產(chǎn)品規(guī)格： BR，90%

包 裝： 5克/25克/100克/1公斤

CAS號(hào)：9010-05-3

級(jí)別：BR

含量：≥90.0%

干燥失重：≤10.0%

性狀：微黃色至黃褐色粉末，溶于水

用途：生化研究。制造食品調(diào)味劑、核酸類藥物研究

保存：2～8℃