實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；

3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

甲醇/二氯甲烷(1:1)中苯并[b]熒蒽溶液 2ml Aeromonas hydrophila嗜水氣單胞菌PCR試劑盒

甲醇/二氯甲烷(1:1)中苯并[a]蒽溶液 2ml Aeromonas hydrophila嗜水氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒

甲醇/二氯甲烷(1:1)中苯并[a]芘溶液 2ml Aeromonas hydrophila嗜水氣單胞菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

丙酮中氟甲腈溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas punctata斑點(diǎn)氣單胞菌PCR試劑盒

丙酮中氟蟲(chóng)腈硫醚溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas punctata斑點(diǎn)氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中氟蟲(chóng)腈砜溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas punctata斑點(diǎn)氣單胞菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

丙酮中甲拌磷亞砜溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas salmonicida滅鮭氣單胞菌PCR試劑盒

丙酮中甲拌磷砜溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas salmonicida滅鮭氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中二甲戊樂(lè)靈溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas salmonicida滅鮭氣單胞菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

丙酮中烯酰嗎啉溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas sobria溫和氣單胞菌PCR試劑盒

丙酮中噻蟲(chóng)嗪溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas sobria溫和氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中氟啶脲溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas sobria溫和氣單胞菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

丙酮中蟲(chóng)螨腈溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas spp.氣單胞菌通用PCR試劑盒

丙酮中嘧菌酯溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas spp.氣單胞菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

丙酮中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽溶液（無(wú)證書(shū)） 1mL Aeromonas spp.氣單胞菌通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
海螵蛸LAMP鑒定試劑盒圖片矮壯素/氯化氯代膽堿/稻麥立/氯化-2-氯-N,N,N-三甲基乙胺/三西/西西西/2-氯-N,N,N-三甲基乙銨氯化物/(2-氯乙基)三甲基氯化銨/氯化矮壯素/2-氯乙基三甲基氯化銨/二氯膽堿/氯化氯膽堿/氯化三甲基(2-氯乙基)銨鹽/Chlormequat chlorideBR，98%250克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，999-81-5RT

中文名稱(chēng)： 矮壯素

其他名稱(chēng)： 氯化氯代膽堿；稻麥立；氯化-2-氯-N,N,N-三甲基乙胺；三西；西西西；2-氯-N,N,N-三甲基乙銨氯化物；(2-氯乙基)三甲基氯化銨；氯化矮壯素；2-氯乙基三甲基氯化銨；二氯膽堿；氯化氯膽堿；氯化三甲基(2-氯乙基)銨鹽

英文名稱(chēng)： Chlormequat chloride

其他名稱(chēng)： (2-Chloroethyl)trimethylammonium chloride

產(chǎn)品規(guī)格： BR，98%

包 裝： 250克

CAS號(hào)：999-81-5

C5H13Cl2N=158.07

級(jí)別：BR

含量：≥98.0%

PH：3.5～7.5

性狀：至淺黃色結(jié)晶粉末或塊狀物。熔點(diǎn)245℃（部分分解）。易溶于水，在常溫下飽和水溶液濃度可達(dá)80%左右。不溶于苯、二甲苯、無(wú)水乙醇，溶于丙醇。有魚(yú)腥臭，易潮解。在中性或微酸性介質(zhì)中穩(wěn)定，在堿性介質(zhì)中加熱能分解

用途：生化研究。一種優(yōu)良的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可用于小麥、水稻、棉花、煙草、玉米及西紅柿等作物，抑制作物細(xì)胞伸長(zhǎng)，但不抑制細(xì)胞分裂，能使植株變矮，桿莖變粗，葉色變綠，可使作物耐旱耐澇，防止作物徒長(zhǎng)倒伏，抗鹽堿，又能防止棉花落鈴，可使馬鈴薯塊莖增大。

保存：RT

24-表油菜素內(nèi)酯/蕓苔素內(nèi)酯/八仙豐產(chǎn)素/(22R，23R,24R)-2α,3α,22,23-四羥基-24-甲基-5α-膽甾-6-酮/(22R,23R,24R)-2α,3α,22,23-四羥基-β-高-7-氧雜-5α-麥角甾-6-酮/布拉西諾內(nèi)酯/24-Epicastasterone高純，95%100毫克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，78821-43-9保存：-20℃

500毫克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

中文名稱(chēng)： 24-表油菜素內(nèi)酯

其他中文名稱(chēng)： 蕓苔素內(nèi)酯；八仙豐產(chǎn)素；(22R，23R,24R)-2α,3α,22,23-四羥基-24-甲基-5α-膽甾-6-酮；(22R,23R,24R)-2α,3α,22,23-四羥基-β-高-7-氧雜-5α-麥角甾-6-酮；布拉西諾內(nèi)酯

英文名稱(chēng)： 24-Epicastasterone

其他英文名稱(chēng)： (22R,23R,24R)-2α,3α,22,23-tetrahydroxy-24-methy-B-7-oxa-5α-cholestan-6-one

產(chǎn)品規(guī)格： 高純，95%

包 裝： 100毫克/500毫克

CAS號(hào)：78821-43-9

C28H48O6=480.68

級(jí)別：High Purity Grade

含量：≥95.0%

熔點(diǎn)：256～258℃

干燥失重：≤0.7%

性狀：結(jié)晶粉末?？扇苡诩状?、乙醇、四氫呋喃、丙酮等有機(jī)溶劑。水中溶解度5mg/L。

用途：生化研究。在低濃度下（10-5～10-6mg/L）能顯示各種活性，其增加植物的營(yíng)養(yǎng)體生長(zhǎng)和促進(jìn)受精的作用?，F(xiàn)已從幾十種植物體中分離出這類(lèi)化合物，含量很低，如植物體中含有吲哚乙酸（IAA）和脫落酸（ABA）分別約為2mg/kg和60mg/kg，而蕓苔素內(nèi)酯僅0.1mg/kg。 用0.05～0.5mg/L蕓苔素內(nèi)酯對(duì)小麥浸種24h，促進(jìn)根系和株高；分蘗期進(jìn)行葉片施肥，增加分蘗數(shù)；也可在孕穗期以0.01～0.02、0.01～0.02（750L/ha次）、0.01～0.04mg/L（750L/ha次）藥液噴霧處理或浸種