技術原理:

DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當于PCR 體積的1/10）作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

白酒中乙酸乙酯、己酸乙酯 50mL 轉基因元件小麥熱激蛋白基因終止子探針法qPCR試劑盒

白酒中錳 100mL Abalone Herpes-like Virus(AbHV)鮑樣病毒PCR試劑盒

白酒中總酸、總酯 500mL Abalone Herpes-like Virus(AbHV)鮑樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

白酒中酒精度、甲醇 500mL Abalone Herpes-like Virus(AbHV)鮑樣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

白酒中香型鑒定(清香型/老白干香型/醬香型/芝麻香型/濃香型 可選) 50mL Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus(AbSV)鮑癥病毒PCR試劑盒

食用油中飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸 20mL Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus(AbSV)鮑癥病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

肉糜中貂源性成分（定性） 10g Abalone Shriveling Syndrome-associated Virus(AbSV)鮑癥病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

肉糜中狐貍源性成分（定性） 10g Abalone Spherical Virus鮑球狀病毒PCR試劑盒

肉糜中貓源性成分（定性） 10g Abalone Spherical Virus鮑球狀病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

食用油中鄰苯二甲酸二辛酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP) 20mL Abalone Spherical Virus鮑球狀病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

食用油中黃曲霉毒素B1 20mL Absidia corymbifera傘枝梨頭霉PCR試劑盒

食用油中丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）、叔丁基對苯二 200mL Absidia corymbifera傘枝梨頭霉染料法熒光定量PCR試劑盒

食用油中苯并芘 20g Absidia corymbifera傘枝梨頭霉探針法熒光定量PCR試劑盒

食用油中酸價、過氧化值 100g Acanthamoeba spp.多食棘阿米巴屬通用PCR試劑盒

啤酒中酒精度、原麥芽汁濃度、總酸 330mL Acanthamoeba spp.多食棘阿米巴屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒
續(xù)斷探針法PCR鑒定試劑盒價格偶氮脒類引發(fā)劑V65/偶氮二異庚腈/2，2'-偶氮二異庚腈/2，2'-偶氮雙(2，4-二甲基戊腈)/ 2,2’-偶氮-二-(2,4-二甲基戊腈)/偶氮二甲基戊腈/2,2'-氮雜雙異庚腈/ABVN/VAZO52高純，98%100克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，9203592-8℃，避光

500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，

中文名稱： 偶氮脒類引發(fā)劑V65

其他名稱： 偶氮二異庚腈；2，2'-偶氮二異庚腈；2，2'-偶氮雙(2，4-二甲基戊腈)；2,2’-偶氮-二-(2,4-二甲基戊腈)；偶氮二甲基戊腈；2,2'-氮雜雙異庚腈

英文名稱： ABVN

其他名稱： VAZO52；2，2'-azobisisoheptonitrile；2,2'-Azobis(2,4-dimethyl)valeronitrile

產(chǎn)品規(guī)格： 高純，98%

包裝：25克/500克

CAS號：4419-11-8

C14H24N4=248.37

級別：High purity grade

含量：≥98.0%(HPLC)

熔點：40～70℃

活化能：122KJ/mol

性狀：結晶或粉末。溶于甲醇、甲苯和丙酮等有機溶劑，不溶于水。屬于油溶性引發(fā)劑，10h半衰期分解溫度：51℃（在甲苯中）

用途：生化研究。主要用作聚合引發(fā)劑。

保存：2～8℃，避光