實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

受體αElisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： INSRA ELISA Kit 英文縮寫： INSRA

生長(zhǎng)因子ⅡElisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： IGF-Ⅱ ELISA Kit 英文縮寫： IGF-Ⅱ

生長(zhǎng)因子ⅠElisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： IGF-Ⅰ ELISA Kit 英文縮寫： IGF-Ⅰ

抗體Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： Anti-Ins ELISA Kit 英文縮寫： Anti-Ins

降解酶Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： IDE ELISA Kit 英文縮寫： IDE

Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： INS ELISA Kit 英文縮寫： INS

胰島淀粉樣多肽Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： IAPP ELISA Kit 英文縮寫： IAPP

胰蛋白酶原激活肽Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： TAP ELISA Kit 英文縮寫： TAP

胰蛋白酶原ⅡElisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： Try-Ⅱ ELISA Kit 英文縮寫： Try-Ⅱ

胰蛋白酶Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： trypsin ELISA Kit 英文縮寫： trypsin

衣原體蛋白酶樣活性因子Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： CPAF ELISA Kit 英文縮寫： CPAF

一氧化碳血紅蛋白Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： HbCO ELISA Kit 英文縮寫： HbCO

一氧化化氮Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： NO ELISA Kit 英文縮寫： NO

一氧化氮合酶Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： NOS ELISA Kit 英文縮寫： NOS

一氧化氮合成酶Elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱： NOS ELISA Kit 英文縮寫： NOS

氟化鎂(>98%,BR)   進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

氧化鎂(>99%,BR)   進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)  規(guī)格：>99%,BR純度：>95%

硬脂鎂   進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)  規(guī)格：BR純度：>95%

孔雀石綠鹽鹽(>90%,BS)   進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)  規(guī)格：>90%,BS純度：>95%

FMNL1  成蛋白相關(guān)蛋白1一抗    特價(jià)促銷 0.2ml Vildagliptin

GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7  /抗原家族4亞型7一抗    特價(jià)促銷 0.2ml Acetylsalicylic acid

JAKMIP2/NECC1  JAK和微管相互作用蛋白2一抗（JAK和微管相互作用蛋白2）    特價(jià)促銷 0.2ml Acetylsalicylic acid

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白GElisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：hnRNP G ELISA Kit英文縮寫：hnRNP G

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白EElisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：hnRNP E ELISA Kit英文縮寫：hnRNP E

乙酰膽堿受體抗體Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：AChRab ELISA Kit英文縮寫：AChRab

乙酰膽堿Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ACH ELISA Kit英文縮寫：ACH

乙醛脫氫酶18家族成員A1Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ALDH18A1 ELISA Kit英文縮寫：ALDH18A1

乙醛脫氫酶Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ALDH ELISA Kit英文縮寫：ALDH

表面抗原大蛋白Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HBV-LP ELISA Kit英文縮寫：HBV-LP

乙醇脫氫酶Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ADH ELISA Kit英文縮寫：ADH

乙胺碘呋酮Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：AD ELISA Kit英文縮寫：AD

胰脂肪酶Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PL ELISA Kit英文縮寫：PL

胰抑制素Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Pancreastatin ELISA Kit英文縮寫：Pancreastatin

胰激肽原酶Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PK ELISA Kit英文縮寫：PK

胰素樣肽2受體Elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：GLP2R ELISA Kit英文縮寫：GLP2R

LRRC15  富含亮氨重復(fù)蛋白15一抗    特價(jià)促銷 0.2ml Orlistat(Fermentation)

MAGEA10  相關(guān)抗原10一抗    特價(jià)促銷 0.2ml Orlistat(Fermentation)

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MAGEA2  相關(guān)抗原2一抗    特價(jià)促銷 0.2ml Montelukast sodium

公司名稱 上海一研生物科技有限公司

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