技術(shù)原理:

DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。

在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

使用及效果：

將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當于PCR 體積的1/10）作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

實驗注意事項：

1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

中粘度羥丙基纖維素   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：4000~6500 mpa.s,BR純度：>95%

3吲哚基betaD吡喃半乳糖苷(>98%(TLC),BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%(TLC),BR純度：>95%

3吲哚基betaD葡糖苷環(huán)已鹽(>98%(HPLC),BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%(HPLC),BR純度：>95%

碘代(>98%,醫(yī)藥級)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,醫(yī)藥級純度：>95%

化鐵 (II)(>70%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>70%,BR純度：>95%

四氧化三鐵(>98%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

氧化鐵(III)(>98%,BC)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BC純度：>95%

還原鐵粉(>98%,BC)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BC純度：>95%

異佛爾(>98%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

異香草醛(>98%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

異香草醛(標準品)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>99%,標準品純度：>95%

衣康(>98%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

哲納爾氏染色素   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：BS純度：>95%

蛋白激酶仰制劑KT5823(>97%(HPLC),BC)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>97%(HPLC),BC純度：>95%

L阿拉伯糖(>98%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

L()二酰酒石一水(>98%,BR)   進口/國產(chǎn)  規(guī)格：>98%,BR純度：>95%

Aggrecan1  軟骨蛋白聚糖一抗    特價促銷 0.1ml Phenformin hydrochloride

phosphoANAPC1 (Ser355)  化細胞周期末期促進復(fù)合蛋白APC1一抗    特價促銷 0.1ml Cefoperazone sodium

DAD1  細胞死亡防衛(wèi)蛋白1一抗    特價促銷 0.2ml Cefoperazone sodium

TCERG1/CA150  轉(zhuǎn)錄延伸調(diào)節(jié)蛋白1一抗    特價促銷 0.1ml NBenzylglycine

CAB39L  鈣結(jié)合蛋白樣39一抗    特價促銷 0.2ml Zanamivir

Aggrecanase2/ADAMTS5  軟骨蛋白聚糖一抗    特價促銷 0.1ml Zanamivir

CAGE1/CT3/CT95  /抗原3一抗    特價促銷 0.2ml Doxifluridine/5Fluoro5′deoxyuridine

CD66d/CEAM3  癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子3一抗    特價促銷 0.2ml Methazolamide
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