上海紫一試劑廠專注電池類新材料的開發(fā)

硫酸鋁鉀(銨)造成部分食品鋁污染的研究

目的調(diào)查食品在加工過程中使用硫酸鋁鉀(銨),造成部分食品鋁污染的現(xiàn)狀,為確定污染水平提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法樣品經(jīng)干燥、灰化、定容后,用鉻天青S分光光度法檢測,鋁的殘留量以干樣品中鋁計。結(jié)果共檢測194份樣品,鋁含量在5.00～10522mg/kg之間,其中45.4%樣品超標(biāo)。結(jié)論油條油餅、粉條粉皮、海蟄存在鋁污染問題。

硫酸鋁鉀暴露抗原免疫組化法檢測HPV

為了提高應(yīng)用免疫組化方法 ( ABC法 )檢測 石蠟包埋組織中的乳頭狀瘤病毒 ( HPV)效果 ,我 們使用 10% 硫酸鋁鉀處理切片 (暴露抗原 ) ,并與 常規(guī)免疫組化染色的胰蛋白酶消化法和目前常用 的微波內(nèi)抗原修復(fù)法的染色結(jié)果進(jìn)行比較。 硫酸 鋁鉀暴露抗原后取得了定位準(zhǔn)確、顏色清晰和 9 / 10的陽性結(jié)果。證實(shí)佐劑硫酸鋁鉀能很好地暴露 抗原。 1 材料與方法 1. 1 標(biāo)本 選用我院 1996年門診切除的外陰尖 銳濕疣 10例 ,用福爾馬林固定 ,四級丙酮脫水 ,石 蠟包埋。 1. 2 試劑配制 1. 2. 1 10% 硫酸鋁鉀溶液 將硫酸鋁鉀 10 g加 入蒸餾水 100 ml 中 ,加溫溶解 ,室內(nèi)冷卻 ,加 10%氫氧化鈉調(diào)至 pH5. 5(大約 5∶ 1) ,液體呈混 懸液。 1. 2. 2 特異性免疫試劑 兔抗牛 HPV 多* 抗體為 Dako公司生產(chǎn) , ABC試劑盒美國 Vectastain公司生產(chǎn) ,按包裝說明進(jìn)行。 1. 2. 3 3, 3-四鹽酸二氨基聯(lián)苯胺 ( DAB)配制 將 1 mg DAB于 0. 05 mol· L - 1 Tris溶液 ( p H 7. 6 ) 10 ml 溶解后測 p H值 ,如果偏堿加少許 DAB,偏酸加少量 Tris液 ,最適 pH為 7. 0～ 7. 2, 臨用時加 3% H2 O2 0. 5 ml。 1. 3 儀器 微波爐為日本產(chǎn) Sharp 3A65型 ,最 大功率 850 W ,分五檔可調(diào)。 1. 4 染色步驟 1. 4. 1 3 μm石蠟切片 ,常規(guī)脫蠟至水。 1. 4. 2 3% H2O2 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶 ,室溫 10 min。 1. 4. 3 流水洗 5 min, PBS 5 min。 1. 4. 4 10%硫酸鋁鉀溶液于 57℃暴露抗原 30 min,或于微波爐“ M ED”檔 3 min,置留 27 min。 1. 4. 5 流水洗切片 10 min。 1. 4. 6 PBS洗 5 min。 1. 4. 7 5% 非免疫血清 37℃于濕盒中 15 min。 1. 4. 8 滴加一抗 ( 1∶ 150) 37℃ 30 min, 4℃冰箱 過夜。 1. 4. 9 余按免疫組化法常規(guī)進(jìn)行。 1. 5 結(jié)果判斷 HPV 陽性物質(zhì)以細(xì)胞核呈棕黃 色 ,位于表皮 1 /3～ 2 /3處的空泡細(xì)胞中央為判斷 標(biāo)準(zhǔn)。 低倍視野查到 1個陽性細(xì)胞為±; 2～ 3個 陽性細(xì)胞為+ ; 3～ 5個陽性細(xì)胞為+ + ; 6個以上 陽性細(xì)胞為+ + + 。 2 結(jié)果 陽性物質(zhì)棕黃色 ,局限于核內(nèi) ,陰性染色細(xì)胞 核復(fù)染蘇木素。硫酸鋁鉀暴露抗原陽性表達(dá)為 9 / 10;枸櫞酸鈉微波內(nèi)暴露抗原法為 2 /10;胰蛋白 酶消化法均為陰性。 結(jié)果見表 1～ 2。 表 1 硫酸鋁鉀、枸櫞酸鈉、胰蛋白酶 ( pH)在微波爐內(nèi)暴露 抗原作用檢測 HPV表達(dá)的比較 溫度 硫酸鋁鉀 3. 5 5. 5 7. 5 枸櫞酸鈉 6. 0 胰蛋白酶 7. 4 37℃ + + + + - - - 47℃ + + + + + ± - 57℃ + + + + + + - 67℃ ± + - + - 77℃ - - - - - 87℃ - - - - - 100℃ - - - - - 表 2 硫酸鋁鉀溶液 pH5. 5, 57℃不同時間 暴露抗原 HPV陽性表達(dá)的比較 15 min 結(jié)果 異染色 30 min 結(jié)果 異染色 45 min 結(jié)果 異染色 60 min 結(jié)果 異染色 + - + + + - + + + - + + + 3 討論 根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì) ,在 6 mol· L - 1 HCI真空 條件下 110℃ ,才能水解成氨基酸 〔1〕 ,因而病理標(biāo) 本在處理過程中抗原或抗體不易丟失。 造成免疫 組化染色假陰性的關(guān)鍵是組織受有機(jī)溶劑作用發(fā) 生變性 ,變性后肽鏈又借次級鍵相互締合成較大 的聚合物而沉淀〔 1〕 ,本來變性是某些基團(tuán)暴露于 分子表面 ,但又被聚合物包含到內(nèi)部 ,抗原與抗體的結(jié)合部位就在分子表面 〔 2〕 ,如果不設(shè)法暴露抗 原 ,抗原與抗體得不到接近 ,失去結(jié)構(gòu)上相互誘導(dǎo) 適應(yīng)〔3〕 ,不利于抗原與抗體形成復(fù)合物 ,是造成假 陰性的直接原因。我們根據(jù)硫酸鋁鉀的化學(xué)作用 , 將該溶液 p H調(diào)至蛋白等電點(diǎn)的 p H 5. 5,在 57℃ 作用切片暴露抗原 ,明顯提高陽性結(jié)果和強(qiáng)度。硫 酸鋁鉀暴露抗原的機(jī)理是: ( 1)含硫元素化合物: 硫元素比較活潑 ,它的*氧化物亞硫酸根對應(yīng) 水化物是硫酸 ,強(qiáng)酸能奪取蛋白質(zhì)顆粒表面水分 , 破壞親水鍵 ,暴露疏水鍵 ,次級鍵破壞 ,肽鏈松散 開來 ,解聚; ( 2)鋁離子是兩性氫氧化物 ,對羧基的 酸性基團(tuán)和氨基的堿性基團(tuán)都能以鹽的方式結(jié) 合 ,使蛋白質(zhì)對應(yīng)基不對稱性增加產(chǎn)生抗原聚集 作用。 ( 3)其它作用: 硫酸鋁鉀在免疫學(xué)沉淀類毒 素增強(qiáng)抗原性起佐劑 ( adjuv ant)作用; 鋁離子對 多種抗原性較弱物質(zhì)能聚集或吸附于其表面增強(qiáng) 抗原性強(qiáng)度〔2〕 ,根據(jù)免疫化學(xué)抗原與抗體結(jié)合和 底物與酶結(jié)合相互作用類似的理論 〔4〕 ,金屬離子 可能是空間構(gòu)型的必需輔助因子 ,起橋梁基團(tuán)作 用 ,和作用物與抗體螯合起來形成一種絡(luò)合物〔 1〕 , 激活劑 ( activ ato r)作用可能參與活性中 心構(gòu) 成〔 3〕 ,鉀、鎂離子和 ATP等結(jié)合成復(fù)合物對許多 酶系統(tǒng)有激活作用 〔5〕 。

更多產(chǎn)品請登陸克拉瑪爾  官網(wǎng)查詢

公司聯(lián)系電話：021-67152090,4001650900