上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應(yīng)的分子生物學(xué)試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢(shì)價(jià)格，歡迎新老客戶咨詢認(rèn)購(gòu)。

產(chǎn)品詳細(xì)信息

名稱：豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨

規(guī)格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【用途】用于豬傳染性胃腸炎病毒病的檢測(cè)、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【操作步驟】

1.RNA提取  

(1)取疑似豬傳染性胃腸炎病毒病的病料（空腸、小腸及其內(nèi)容物等），用Hank’s液或PBS研磨成1：3懸液，在－20 ℃反復(fù)凍融3次，經(jīng)3 000 r/min離心5 分鐘，上清液再經(jīng)12 000 r/min離心15分鐘，上清液－70 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)取200uL上清液（或標(biāo)準(zhǔn)品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入400uLSR-I，反復(fù)顛倒幾次混勻，室溫放置5~10分鐘。

(3)加入200uL氯仿，漩渦振蕩15秒混勻。室溫下放置2~3分鐘。

(4)12000r/min離心10分鐘，取上層水相(注意：切勿吸取到里兩相之間的雜質(zhì))，轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的EP管中，再加入等體積異丙醇混勻，室溫放置10分鐘。

(5)12000r/min離心10分鐘，棄去上清，加入SR-II 700uL，充分洗滌沉淀RNA后，12000r/min離心5分鐘，小心吸去上清（注意：嚴(yán)格防止RNA丟失）。

(6)用潔凈吸水紙吸干管壁的SR-II，室溫放置2~3分鐘。用20uLTU-5溶解，即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

72℃延伸

 3.PCR操作

 4.電泳

   稱量0.25g瓊脂糖，放入錐形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×濃縮液，儲(chǔ)存?zhèn)溆茫谖⒉t中熔解，加入1.5μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽，加入梳子，倒入瓊脂凝膠，待凝固后，將PCR產(chǎn)物6μl混合1.5μl TU-7，加樣于凝膠孔中，同時(shí)在相鄰孔加入3μlTU-8，在100v 電壓下，1×TAE液中電泳30分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

    在342bp（豬放線桿菌胸膜肺炎）及841bp（副豬嗜血桿菌）位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性

豬傳染性胃腸炎病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒

【注意事項(xiàng)】

1. 每次使用，開(kāi)蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫?cái)R置太久。

3. 盡量建立PCR試驗(yàn)操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不精確、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無(wú)結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過(guò)程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。