上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售豬放線桿菌胸膜肺炎和副豬嗜血桿菌多重PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應的分子生物學試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價格，歡迎新老客戶咨詢認購。

產(chǎn)品詳細信息

名稱：豬放線桿菌胸膜肺炎和副豬嗜血桿菌多重PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨

規(guī)格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【用途】  用于豬放線桿菌胸膜肺炎和副豬嗜血桿菌病的檢測、診斷和流行病學調(diào)查。。

【操作步驟】

1. 病料處理

   取適量病料關(guān)節(jié)液、心包積液、肺臟等組織，于滅菌研缽充分研磨，用PBS液按照1：3稀釋成均勻乳劑，-20℃反復凍融3次以上。

2 . DNA的抽提

(1) 取已凍融好的病料8000r/min離心5min，取上清500μl（或質(zhì)控樣品T，500μl），加50μl SR-I和6μl SR-II，50℃水浴1-2h，并不時顛倒混勻一下。

(2) 加入等量酚：氯仿（1：1），漩渦振蕩20s，4℃、12000r/min，離心5min。

(3) 取上清，加入等量氯仿，振蕩混勻，4℃、12000r/min，離心5min。

(5) 取400μl上清，加入800μl 無水乙醇，再加40μl SR-III，混勻。-20℃放置30~60min，4℃，12000r/min，離心10min，小心棄上清，沉淀即為DNA。用75%乙醇（滅菌雙蒸水配，每次加入500μl）沖洗2次，小心吸去75%乙醇，勿使DNA丟失，室溫晾干或超凈工作臺風干15-25min，加入20μl TU-5溶解即為模板，即用或-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.PCR操作

 4.電泳

   稱量0.25g瓊脂糖，放入錐形瓶，加入25mL 1×TAE液（可配置50×濃縮液，儲存?zhèn)溆茫谖⒉t中熔解，加入1.5μl的TU-9混勻。封閉好電泳槽，加入梳子，倒入瓊脂凝膠，待凝固后，將PCR產(chǎn)物6μl混合1.5μl TU-7，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加入3μlTU-8，在100v 電壓下，1×TAE液中電泳30分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

    在342bp（豬放線桿菌胸膜肺炎）及841bp（副豬嗜血桿菌）位置出現(xiàn)擴增帶，實驗結(jié)果為陽性

豬放線桿菌胸膜肺炎和副豬嗜血桿菌多重PCR診斷試劑盒

【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。

3. 盡量建立PCR試驗操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結(jié)果情況，不予負責。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。