試劑的準備

20X洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20X洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.自動洗板機；每孔注入洗液350ML，浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放加4℃。

2.設置標準品也和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50ML；

3.樣本孔先加待測樣本10ML，再加樣本稀釋液40ML；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100ML，用封板膜封信反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min.

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A.B各50ML，37℃避光孵育15min.

7.每孔加入終止液50ML,15min內，在450NM波長處測定各孔的OD值