準(zhǔn)備物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀釋液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

產(chǎn)品說明書                                   1份

普通PCR反應(yīng)流程：

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

反應(yīng)五要素：

純綠青霉PCR檢測試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

使用方法 ：   

1 實驗所需器材與試劑

1.1 器材

1）PCR儀

2）PCR反應(yīng)管

3）電泳儀及水平電泳槽

4）高速離心機(jī)

5）微量移液器及移液器吸頭

1.2 試劑

1）瓊脂糖

2）EB（溴化乙錠）

3）去離子水或雙蒸水

注意事項：   

5.1使用本試劑前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。

5.2 操作時應(yīng)盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個檢測過程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染。 5.3 實驗時，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）。

5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過多的二聚體。

5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測靈敏度，建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。

甜葉懸鉤子苷 訂購|咨詢 ACS ELISA Kit  大鼠脂酰輔酶A合成酶 規(guī)格： 10mg

溴東莨菪堿 訂購|咨詢 Obestatin (Human Ghrelin/GHRP) ELISA Kit  人抑制素ELISA試劑盒 規(guī)格： 20mg

丹參素 訂購|咨詢 PARC(Mouse pulmonary activation regulated chemokine) ELISA Kit  小鼠肺部活調(diào)節(jié)趨因子 規(guī)格： 20mg

常春藤皂苷元 訂購|咨詢 NE (Rabbit neutrophil elastase) ELISA Kit  兔子中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶 規(guī)格： 20mg

橙皮苷 訂購|咨詢 C3a (Rabbit Complement fragment 3a) ELISA Kit  兔子補(bǔ)體斷3a 規(guī)格： 20mg

白屈菜紅堿 訂購|咨詢 LZM(Mouse Lysozyme) ELISA Kit  小鼠溶菌酶 規(guī)格： 20mg

歐前胡素 訂購|咨詢 CDl4(Human cluster Of differentiation) ELISA Kit  人CD14分子 規(guī)格： 20mg

L-薄荷 訂購|咨詢 CACT ELISA Kit  大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格： 20mg

紫杉 訂購|咨詢 AIF(Human apoptosis inducing factor) ELISA Kit  人凋亡誘導(dǎo)因子 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

百秋李 訂購|咨詢 MMP-3 (Rabbit matrix metalloproteinase 3) ELISA Kit  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶3 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

吳茱萸次堿 訂購|咨詢 pACCase ELISA Kit  大鼠磷輔酶A羧酶 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

秦皮甙 訂購|咨詢 sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit  小鼠可溶性CD30 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

溴東莨菪堿 訂購|咨詢 TRAP-5b ELISA Kit(Rabbit)  兔酒石磷酶TRAP-5b ELISA試劑盒 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

哈巴俄苷 訂購|咨詢 sMHC-2(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit  小鼠可溶性肌球蛋白重鏈 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

人參皂甙 Rh1 訂購|咨詢 MT ELISA Kit  大鼠金屬蛋白 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

甜菜堿 訂購|咨詢 sCD40L (Rabbit differentiation 40 ligand) ELISA Kit  兔子可溶性CD40配體 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

(E,E)-3,7-二基-10-(1- 訂購|咨詢 LCA/CD45(Human leukocyte common antigen) ELISA Kit  人白細(xì)胞共同抗原 規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

異葒草素 訂購|咨詢 MHC I /RLA I (Rabbit major histocompatibility complex I ) ELISA Kit  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類 規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial
純綠青霉PCR檢測試劑盒GLT8D1  糖基轉(zhuǎn)移酶8結(jié)構(gòu)域1抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse CA724 ELISA Kit進(jìn)口/分裝

GLTPD2  糖脂轉(zhuǎn)移蛋白結(jié)構(gòu)域2抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit 特價供應(yīng)

NTAL  B淋巴細(xì)胞鏈接激活蛋白抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

KRCC1  含賴氨酸卷曲螺旋蛋白1抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-Ⅰ ELISA Kit 進(jìn)口/原裝

LACTB2  β內(nèi)酰胺酶樣蛋白2抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA Kit 特價促銷

LAPTM4A  溶酶體相關(guān)膜蛋白4α抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TGSF ELISA Kit進(jìn)口/原裝

LMBR1/DIF14  分化相關(guān)基因14抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse major histocompatibility complexⅠ,MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit進(jìn)口/原裝

VMAT2  腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ ELISA Kit進(jìn)口/原裝