準(zhǔn)備物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                   微升

稀釋液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                   毫升

產(chǎn)品說明書                                   1份

普通PCR反應(yīng)流程：

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

反應(yīng)五要素：

鳩寧病毒PCR檢測試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

使用方法 ：   

1 實(shí)驗(yàn)所需器材與試劑

1.1 器材

1）PCR儀

2）PCR反應(yīng)管

3）電泳儀及水平電泳槽

4）高速離心機(jī)

5）微量移液器及移液器吸頭

1.2 試劑

1）瓊脂糖

2）EB（溴化乙錠）

3）去離子水或雙蒸水

注意事項(xiàng)：   

5.1使用本試劑前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。

5.2 操作時(shí)應(yīng)盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個(gè)檢測過程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行，以避免交叉污染。 5.3 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時(shí)禁止激烈振蕩，只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻）。

5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，以免形成過多的二聚體。

5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測靈敏度，建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。

人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：≥95%,進(jìn)口半鹽Isosilybin (A+B) mixture

人催產(chǎn)素(OT)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：≥90%,進(jìn)分Isovanillin

人促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA試劑盒  質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BRCapillarisin

人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：3萬U/gSkimmin

人促胰液素/分泌素受體(SR)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：BR,70萬u/ml液體Icarisid Ⅱ

人促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：BR,酶活5萬,粉末Tiliroside

人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：≥2000KU/mg protein,(牛胰)Ginkgolic Acid (C13:0)

人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒 質(zhì)量規(guī)格：BR,4000u/gGinkgolic Acid (C17:1)

大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基泡盛曲霉變種 Aspergillus awamori var.

枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis雙孢蘑菇

香菇 Lentinula edodesGoldCassette-HIS/HIS重組標(biāo)簽蛋白快速檢測試劑盒(裝)

Hep B1.2(人肝細(xì)胞)臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereus

人腎透細(xì)胞腺細(xì)胞hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞)

藤黃微球菌 Micrococcus luteus網(wǎng)狀鐮孢

HIC(人小腸細(xì)胞)普雷恩毛霉 Mucor prainii

V5標(biāo)簽免疫親和介質(zhì)宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

熱帶假絲酵母 Candida tropicalisCOLO 205(人結(jié)腸細(xì)胞)

L-O2(人正常肝細(xì)胞)球孢白僵菌 Beauveria bassiana

香菇 Lentinula edodesGH3, 大鼠垂體生激素腺瘤

人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基

大鼠肺大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基C-33 A(人子宮頸細(xì)胞)
鳩寧病毒PCR檢測試劑盒APIP/Apaf1 Interacting Protein  凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Human growth hormone releasing hormone，GHRH ELISA Kit特價(jià)促銷

APPD/LAPF  凋亡誘導(dǎo)蛋白D抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Human follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH ELISA Kit 進(jìn)口/分裝

ANT-1/ATP carrier protein 1/Adenine Nucleotide Translocase 1  腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：human corticotropin releasing hormone，CRH ELISA Kit特價(jià)促銷

CHAC1  陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控樣蛋白1抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：human adrencocorticotropic hormone，ACTH ELISA Kit進(jìn)口/原裝

CIDEC  細(xì)胞死亡活化蛋白抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Human corticotropin-releasing factor，CRF 進(jìn)口/原裝

CLPTM1L/CRR9  順氯氨鉑耐藥相關(guān)蛋白9抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Human growth hormone releasing hormone，GHRH ELISA Kit進(jìn)口/分裝

Calpain 12  鈣激活蛋白酶12抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA Kit特價(jià)促銷

Coronin 3  冠蛋白3抗體規(guī)格:96T/48T英文名稱：Human gastrin receptor，GsaR ELISA Kit進(jìn)口/分裝